【摘要】：感染性疾病對(duì)人類的困擾仍很嚴(yán)重，而且抗生素在感染性疾病治療過程中有一定局限性，因此，免疫調(diào)節(jié)劑成為感染性疾病防治研究的熱點(diǎn)。細(xì)菌的包被含有眾多的抗原決定簇，是很好的免疫調(diào)節(jié)劑，國外已開發(fā)出相應(yīng)的細(xì)菌裂解物免疫調(diào)節(jié)劑。本文在國外研究的基礎(chǔ)上進(jìn)行優(yōu)化制備雙歧雙歧桿菌、金黃色葡萄球菌、肺炎鏈球菌、流感嗜血桿菌的細(xì)菌裂解物，研究它們各自的以及復(fù)合后的體內(nèi)外免疫調(diào)節(jié)作用。 本文采用化學(xué)酶解法制備雙歧雙歧桿菌完整肽聚糖(Bb_(WPG))，采用超聲破碎法制備雙歧桿菌裂解物(Bb_(BL))、肺炎鏈球菌裂解物(Sp_(BL))、流感嗜血桿菌裂解物(Hi_(BL))，采用酶解法制備金黃色葡萄球菌裂解物(Sa_(BL))。淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果表明Bb_(WPG)、Bb_(BL)、Sa_(BL)、Bb_(WPG)+Sa_(BL)、Bb_(BL)+Sa_(BL)、Bb_(WPG)+Sa_(BL)+Sp_(BL)+Hi_(BL)、Bb_(BL)+Sa_(BL)+Sp_(BL)+Hi_(BL)刺激細(xì)胞免疫功能。結(jié)果顯示，Bb_(WPG)濃度從0.07g／L增至2.25g／L均未見有明顯的淋巴細(xì)胞增殖；Bb_(BL)濃度達(dá)到0.71g／L就可明顯刺激T淋巴細(xì)胞增殖；Sa_(BL)的濃度為0.012g／L可以明顯刺激淋巴細(xì)胞產(chǎn)生增殖作用，而且隨著濃度的升高，刺激作用不斷增強(qiáng)，濃度達(dá)到0.195g／L時(shí)刺激作用最強(qiáng)；40％Bb_(WPG)+60％Sa_(BL)組合濃度從0.008g／L到0.5g／L都可明顯刺激淋巴細(xì)胞的增殖作用，其他組合可產(chǎn)生明顯的抑制T淋巴細(xì)胞增殖作用；60％Bb_(BL)+40％Sa_(BL)組合濃度從0.019g／L到1.250g／L都能明顯刺激T淋巴細(xì)胞增殖，70％Bb_(BL)+30％Sa_(BL)組合濃度從0.156g／L到1.250g／L也都能明顯刺激T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生增殖作用，其他組合不能刺激T淋巴細(xì)胞產(chǎn)生增殖作用；濃度為0.045g／L到1.45g／LBb_(BL)+Sa_(BL)+Sp_(BL)+Hi_(BL)復(fù)合物95％(40／42)試驗(yàn)組可產(chǎn)生明顯刺激T淋巴細(xì) 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 胞增殖作用，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01):濃度為0.045留L到1 .459/L BbwPG +SaBL+SPBL+HIBL復(fù)合物有36%(13/36)的試驗(yàn)組可產(chǎn)生明顯刺激T淋巴 細(xì)胞增殖作用，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(PO.05)。溶血空斑試驗(yàn)檢測BbwPG、BbBL、 saBL、BbBL+saBL+spBL+HioL、BbwoG+SaB:+spBL+HieL刺激機(jī)體產(chǎn)生抗體 形成細(xì)胞的能力。0.289/L的BbwPG和0.709/L的BbBL均能明顯刺激小鼠機(jī) 體產(chǎn)生抗體形成細(xì)胞，通過標(biāo)準(zhǔn)化計(jì)算BbwPG刺激小鼠產(chǎn)生抗體形成細(xì)胞的 能力優(yōu)于BbBL;0.1歲L的SaBL可明顯刺激小鼠產(chǎn)生抗體形成細(xì)胞;1 .459/L 的BbBL+s助L+s伽L+HIBL復(fù)合物(BbBL:saoL:spBL:HIBL=6.25:6.25:1:1， 克/克)就可明顯刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生抗體生成細(xì)胞;1.459/L的 Bboo+S鮑L+spBL+HIBL復(fù)合物(Bboo:s如L:SpBL:HisL=8.33:12.5:2.33:1， 克/克)可明顯刺激小鼠機(jī)體產(chǎn)生抗體生成細(xì)胞。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明 Bb*o+SaoL+spBL+HIBL復(fù)合物和BbBL+saBL+SpBL+HIBL復(fù)合物對(duì)小鼠的細(xì)菌 感染具有保護(hù)作用。小鼠經(jīng)0.ZmL濃度為1.459/L的Bb*o+S如L+S如L+HIBL 復(fù)合物兩次免疫后，大腸埃希菌感染小鼠存活率為60%，金黃色葡萄球菌感 染小鼠存活率為91.7%(P(0.05或p0 .01，均與對(duì)照組比較):小鼠經(jīng)0.ZmL 濃度為1.459/L的BbBL+saBL+SpBL+HieL復(fù)合物兩次免疫后，大腸埃希菌感 染小鼠存活率為70%，金黃色葡萄球菌感染小鼠存活率為72.7%(p0 .01，均 與對(duì)照組比較)。小鼠經(jīng)上述兩種復(fù)合物免疫后在細(xì)菌攻擊前未見有明顯的不 良反應(yīng)。 細(xì)菌感染保護(hù)實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取小鼠脾臟、肝臟組織做常規(guī)病理檢查。結(jié) 果顯示上述兩種復(fù)合物免疫小鼠后，都可增強(qiáng)脾臟的免疫功能，使肝臟的炎 癥得到一定程度的局限。兩種復(fù)合物病理檢查結(jié)果無明顯差異。 此外，MTT法檢測BbwPG和BbBL在體外對(duì)結(jié)腸癌細(xì)胞株HT-29細(xì)胞和 THe一5905細(xì)胞的直接抑制作用。結(jié)果顯示，，50一200mg/L的Bboo對(duì)HT-29 細(xì)胞有直接抑制作用，最大抑制率為19%，50一20Om留L的BbBL對(duì)HT-29細(xì) 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 胞也有直接抑制作用，最大抑制率為48.5%;BbwPG和BbBL對(duì)THC一8908細(xì) 胞無直接抑制作用。 我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)，最佳組合的細(xì)菌裂解物復(fù)合物有較好的免疫調(diào)節(jié) 作用。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證其有對(duì)細(xì)菌感染確實(shí)有保護(hù)作用。而且，復(fù)合物 中的BbwPG和BbBL還有一定的抑制腫瘤細(xì)胞作用。本文結(jié)果為將來細(xì)菌裂解 物能成為免疫調(diào)節(jié)劑奠定了基礎(chǔ)。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 梁紅春;乳酸桿菌細(xì)胞裂解物對(duì)家兔實(shí)驗(yàn)性陰道炎的治療作用[D];大連醫(yī)科大學(xué);2007年

本文編號(hào)：2681313