【摘要】：目的：以人皮膚成纖維細胞作為靶細胞，了解人皮膚成纖維細胞和細胞因子在登革病毒原位組織感染和致病中的作用，為探討登革病毒感染的發(fā)病機理并指導臨床治療提供科學依據(jù)。 方法：實驗的第一部分采用胰酶和膠原酶聯(lián)合消化培養(yǎng)法培養(yǎng)人皮膚成纖維細胞，選擇合適的條件進行體外培養(yǎng)并用免疫組織化學法鑒定：第二部分用DV_2感染HSF后，在不同時間(4h、8h、24h、48h、72h、96h)收集感染上清，用甲基纖維素微量病毒空斑法測定病毒滴度(pfu／ml)，用間接免疫熒光法觀察登革病毒抗原陽性細胞，在透射電鏡下找病毒顆粒；第三部分中分別用高、中、低濃度的IL-6、TNF-α、GM-CSF單獨作用于DV_2感染HSF的不同環(huán)節(jié)(病毒吸附時和病毒吸附后)于感染后的不同時間(24h、48h、72h、96h)收集感染上清，測病毒滴度(pfu／ml)；第四部分將HSF接種于24孔板中，DV_2吸附2h后，于感染后不同時間(6h、24h、36h、48h、72h)收集感染上清，，同時做陰性對照，用ELISA法定量測定IL-6、TNF-α的含量。 結果：1．用胰酶和膠原酶聯(lián)合消化在體外可成功培養(yǎng)出人皮膚成纖維細胞，消化的皮膚成纖維細胞接種24h內(nèi)貼壁，免疫組織化學法顯示為成纖維細胞。2．病毒感染后12h即可在培養(yǎng)上清中測出病毒，病毒滴度48h達到高峰，以后下降。用間接免疫熒光法檢測登革病毒抗原陽性細胞，以48h熒光陽性細胞多，胞漿內(nèi)出現(xiàn)很強的熒光。在光鏡和電鏡下，感染細胞均未見明顯的形態(tài)和結構改變，電鏡下在感染細胞胞漿里找到具有致密核心的可疑病毒顆粒。3．登革病毒感染能引起成纖維細胞產(chǎn)生IL-6的水平明顯增高。4．在病毒吸附時中濃度的IL-6能顯著提高病毒產(chǎn)量；在病毒吸附時和病毒吸附后高濃度的TNF-α能抑制病毒的產(chǎn)量。 結論：登革病毒在體外能穩(wěn)定地感染人皮膚成纖維細胞表明成纖維細胞很可能是蚊叮咬后在原位組織中首先支持登革病毒感染的細胞之一；細胞因子在登革病毒感染人皮膚成纖維細胞的致病和免疫過程中起重要作用。
【學位授予單位】：暨南大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R373

【參考文獻】

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本文編號：2681373