【摘要】：目的 制備金黃色葡萄球菌B型腸毒素(staphylococcus aureusenterotoxin B, SEB)的單克隆抗體(Monoclonal antibody, McAb)，建立檢測(cè)金葡菌B型腸毒素的ELISA檢測(cè)方法，并進(jìn)行初步的臨床應(yīng)用。 方法 以天然純化的SEB免疫BALB／C小鼠，采用細(xì)胞雜交瘤技術(shù)，篩選出抗SEB的McAb，在此基礎(chǔ)上建立雙抗體夾心ELISA方法，用標(biāo)準(zhǔn)菌株和臨床分離株進(jìn)行評(píng)價(jià)，并初步應(yīng)用于燒傷病人血清中SEB的檢測(cè)。 結(jié)果 制備了抗SEB-McAb共六株，其中1C_8、1A_5、1D_1、3D_6分泌的McAb類型為Ig G1，2C_(11)、3A_9分泌的McAb類型為Ig G2a。6株中有4株僅與SEB發(fā)生反應(yīng)，有兩株與SEC_1有弱交叉反應(yīng)，與大腸埃希菌、糞腸球菌、綠膿假單胞菌、腐生葡萄球菌均不發(fā)生反應(yīng)。同時(shí)制備了抗SEB多克隆抗體1株。SEB-McAb誘導(dǎo)小鼠腹水純化后效價(jià)為1：12800-1：25600，抗體親和力常數(shù)為5×10~7～2×10~9。Western-blot實(shí)驗(yàn)顯示出一條特異性條帶，位于分子量28.5KDa處，證明了其特異性。用特異McAb建立了雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)SEB，其敏感性高，達(dá)0.078μg/L，高于目前國(guó)內(nèi)報(bào)道的水平。特異性強(qiáng)，重復(fù)性和穩(wěn)定性均較好。雙抗體夾心ELISA方法檢測(cè)臨床分離金葡菌腸毒素結(jié)果顯示，，耐甲氧西林金葡菌(MRSA)中腸毒素的總帶毒率為93.9％，其中B型腸毒素帶毒率最高，占檢出的53.3％，其次為C型(28.5％)。甲氧西林敏感金葡菌的帶毒率僅為28.6％，兩者之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。重度燒傷病人血清中SEB水平明顯高于對(duì)照組及輕度燒傷組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 結(jié)論 制備了抗SEB-McAb，其效價(jià)較高，親和力較強(qiáng)，特異性強(qiáng)。在此基礎(chǔ)上建立雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)SEB，靈敏性達(dá)0.078μg/L，特異性和重復(fù)性均較好，可用于臨床分離菌株SEB的檢測(cè)以及檢測(cè)燒傷病人血清中的SEB。本方法為臨床金葡菌感染的診斷和分型，為闡明SEB的臨床意義提供了方法。
【圖文】：

圖2.1M:蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn);六株McAb(腹水)的SDS一PAGE分析:ZC一l:2:ICs;3:1凡;4:3A9;5:ID一;6:3D6圖2.2單抗的W七stem一blot分析M:蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn);:ZCll;

單抗的W七stem一blot分析
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R392.1

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