發(fā)布時(shí)間：2020-05-23 02:34

【摘要】：胎盤生成的孕激素和雌激素在人類分娩中起重要作用。孕激素是維持妊娠子宮肌靜息狀態(tài)的主要激素，而雌激素則是激活子宮的激素。雖然人類妊娠末期孕激素和雌激素水平都持續(xù)增高，但雌激素／孕激素的值卻升高，有利于激活子宮發(fā)動(dòng)分娩。因此研究胎盤雌激素和孕激素生成調(diào)節(jié)的機(jī)理不僅有助于揭示人類分娩啟動(dòng)機(jī)制，還可為防治早產(chǎn)等疾病提供理論依據(jù)。 胎盤合成和分泌的CRH是參與人類分娩啟動(dòng)的重要激素，但胎盤分泌的CRH對(duì)胎盤雌激素和孕激素合成的調(diào)節(jié)及其機(jī)制尚不清楚。本研究利用原代培養(yǎng)的人類胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞進(jìn)行了以下兩個(gè)方面的研究：1、觀察CRH是否影響胎盤細(xì)胞雌二醇(estradiol，E_2)生成，確定CRH的作用是否通過CRH受體介導(dǎo)，了解CRH調(diào)節(jié)作用的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑；明確CRH是否影響胎盤雌激素生成關(guān)鍵酶——細(xì)胞色素P-450芳香化酶(P-450 aromatase，P-450arom)的基因轉(zhuǎn)錄。2、觀察CRH對(duì)胎盤孕酮(progesterone，P_4)生成的調(diào)節(jié)作用及其作用的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑；明確胎盤孕激素合成酶即細(xì)胞色素P-450側(cè)鏈裂解酶(P-450 side chain cleavage enzyme，P-450scc)和3β-羥基類固醇脫氫酶1(3β-hydroxysteroiddehvdrogenase1，3β-HSD1)基因的轉(zhuǎn)錄是否受CRH調(diào)節(jié)。 主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果和結(jié)論如下： 1)CRH促進(jìn)胎盤細(xì)胞生成E_2，且這種作用具有劑量依賴效應(yīng)。CRH受體拮抗劑α-Helical CRH_(9-41)能夠阻斷CRH的促進(jìn)作用，說明CRH的作用是通過CRH受體介導(dǎo)的。α-Helical CRH_(9-41)也能降低細(xì)胞E_2基礎(chǔ)量的產(chǎn)生，，說明胎盤細(xì)胞合成和分泌的CRH也可促進(jìn)E_2的生成。PKA和PKC的抑制荊(H-89和G6976)都能阻斷CRH的作用，表明CRH可通過PKA和PKC途徑促進(jìn)胎盤E_2的生成。應(yīng)用Northern blot觀察P-450arom mRNA的表達(dá)，結(jié)果顯示CRH可以促進(jìn)P-450arom mRNA的表達(dá)，a-Helical CRH_(9-41)、H-89和G6976都阻斷CRH促進(jìn)P-450arom mRNA表達(dá)的作用。說明CRH通過促進(jìn)P-450arom基因的轉(zhuǎn)錄，進(jìn)而增加胎盤細(xì) 碩士李位格大 中次摘要 胞E:的生成。 2)CRH抑制胎盤細(xì)胞生成P。，抑制作用具有劑量依賴性。CRH受體拮抗劑 a一Heli。alCR比;l能夠逆轉(zhuǎn)CRH的作用，說明CRH的作用是通過CRH受體介導(dǎo)的。 a一Hel ical CRH，一;，也能促進(jìn)細(xì)胞P;基礎(chǔ)量的產(chǎn)生，說明其阻斷了胎盤細(xì)胞產(chǎn)生的 內(nèi)源性CRH抑制只生成的作用。PKC的抑制劑叻6976可阻斷CRH對(duì)P;生成的抑 制作用.但PKA的抑制劑H一89也可抑制P;的生成。實(shí)時(shí)熒光定量PCR測定 P一450see和3p一HSDI mRNA表達(dá)的結(jié)果顯示，CRH抑制P一450see和3p一HSDI mRNA 的表達(dá)，a一Helieal CRHg一引能阻斷CRH的抑制作用，GO6976也可阻斷CRH對(duì) P一450see和3p一HSDI mRNA表達(dá)的抑制作用。但H一89卻抑制P一450see和3p 一HSDI mRNA的表達(dá)。說明CRH可通過抑制P一450see和3p一HSD基因的轉(zhuǎn)錄，而 減少胎盤細(xì)胞P;的生成，其作用途徑與PKC有關(guān)。 夕 結(jié)論:1、cRH通過促進(jìn)胎盤P一450arom基因的轉(zhuǎn)錄進(jìn)而促進(jìn)雌激素的生成， 這種作用是由其受體介導(dǎo)。細(xì)胞內(nèi)PKA和PKC信號(hào)途徑是CRH促進(jìn)EZ的生成作 用的機(jī)制之一。2、CRH抑制胎盤P一45Oscc和3p一HSDI基因的轉(zhuǎn)錄，從而抑制 孕激素的生成，且這種抑制作用由其受體介導(dǎo)。PKC信號(hào)途徑是其抑制作用的細(xì) 胞內(nèi)機(jī)制之一。3、CRH促進(jìn)胎盤雌激素生成而抑制孕激素的生成，從而可能使 妊娠末期母體血中雌激素/孕激素的值升高，這可能是CRH啟動(dòng)分娩的機(jī)制之一。
【圖文】：

圖2.胎盤細(xì)胞總RNA電泳oftheEthediumbromide一stained55、18Sand28SRNAs計(jì)bank中人P450arom基因序列，用PrimerPremiers軟擴(kuò)增產(chǎn)物理論值約440bp。TCATGCGAGTCTGGATCTCTGGAGAGGAAACA一3‘GAGGAGAGCTTGCCATGCATCAAAATAACCT一3’R鏈的合成為模板，按Gibco試劑盒進(jìn)行RT反應(yīng):一HZOS協(xié)1omhexamers(SOng/林1)2拼1AI卜g

29.5林l液4.5pl:3“l(fā)1pllpl1協(xié)15plTaq一DNA聚合酶(su鄺一)ee，72oClmin，40個(gè)循環(huán)物pl，應(yīng)用1.5%瓊脂糖凝膠電泳分量標(biāo)一記比較顯示約44ObP的條帶，
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R33

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本文編號(hào)：2677004