【摘要】： 作為重要的炎細(xì)胞，巨噬細(xì)胞的反應(yīng)性在炎癥發(fā)生發(fā)展中起著 重要作用。對(duì)于炎癥過(guò)程中巨噬細(xì)胞反應(yīng)性的變化文獻(xiàn)上已有許多 報(bào)告，但結(jié)果不盡相同。這些工作都是用“細(xì)胞群”作為研究對(duì)象 的，而我們認(rèn)為既然巨噬細(xì)胞中存在表型不同的亞群，那么它們的 功能也應(yīng)該是不均一的。用細(xì)胞群進(jìn)行的工作有它自身的局限性， 而在單細(xì)胞水平進(jìn)行研究可能會(huì)得到更為有意義的信息。因此，本 課題主要研究了單細(xì)胞水平上小鼠腹腔巨噬細(xì)胞（PM）的反應(yīng)性。 根據(jù)我們的研究目的及現(xiàn)有條件，我們首先選擇了基態(tài)的細(xì)胞 內(nèi)游離鈣離子濃度（[Ca~(2+)]i）作為研究指標(biāo)，并對(duì)小鼠PM的測(cè)鈣條 件進(jìn)行了優(yōu)化，最終確定小鼠PM[Ca~(2+)]i測(cè)定的條件為：PM貼壁時(shí) 間30—90min；負(fù)載熒光指示劑的條件為2μM Fura-2/AM、0.04％ pluronic F-127，室溫孵育1h；而且每一只小鼠都取細(xì)胞用EGTA/AM 法單獨(dú)測(cè)定一批Grynkiewicz常數(shù)。對(duì)7只正常小鼠共392個(gè)PM基 態(tài)[Ca~(2+)]i的研究表明小鼠PM的基態(tài)[Ca~(2+)]i呈正態(tài)分布，但波動(dòng)范 圍較大（從低于20nM到高于100nM），以[Ca~(2+)]i在40—60nM的細(xì) 胞數(shù)量最多（約占50％）。用PMA、fMLP刺激后PM[Ca~(2+)]i升高， 但細(xì)胞間[Ca~(2+)]i升高的幅度各不相同，受刺激后[Ca~(2+)]i升高的峰值 碩士學(xué)位論文 一中文蛔耍一 和基態(tài)［Caz”］i之間呈正相關(guān)（PMA刺激組：r＝0．52，P＜0＊l，n＝58； eLP刺激組：rso．59，p＜0．of，n＝44。此兩組實(shí)驗(yàn)均以不同的小鼠重 復(fù)3次，其他兩只小鼠的結(jié)果與上同。下面的表述方法同此人這些 結(jié)果說(shuō)明正常小鼠PM的反應(yīng)性可能是不均一的，而基態(tài)＊ 勺i水 平的不均一是PM反應(yīng)性不均一的基礎(chǔ)。 細(xì)胞的反應(yīng)性一般是指具體的效應(yīng)，而鈣離子只是第二信使， 因此我們又選擇了一個(gè)鈣離子依賴性的、常規(guī)用于反映巨噬細(xì)胞的 活化水平和殺傷功能的效應(yīng)指標(biāo)—一超氧陰離子閉J。我們建立 了可在同一個(gè)巨噬細(xì)胞同時(shí)定量檢測(cè) O廠和＊勺i的方法，隨后在4 只小鼠檢測(cè)了PM的基態(tài)＊ah］i與其產(chǎn)生 O廠的反應(yīng)之間的關(guān)系，結(jié) 果表明兩者也呈顯著正相關(guān)（r＝0．42，p刃＊，n＝43，重復(fù) 4次人 從 而進(jìn)一步說(shuō)明了巨噬細(xì)胞基態(tài)＊d勺i水平不均一性的意義。 為了研究 PM基態(tài) ［Cd勺 i不均一性的病理意義，我們利用小鼠 30％體表面積深＊度燙傷的病理模型，并檢測(cè)其基態(tài)＊“］i和產(chǎn)生 OZ二水平的變化，結(jié)果表明 6 ／q燙傷小鼠基態(tài)rCal勺＊，11＜） 顯著高于 6只假燙小鼠（＊土28nM，n二。395，p＜0＊5），而且燙傷與假 燙小鼠 PM的基態(tài)＊aD］i和正常小鼠一樣也是不均一的，兩者同樣 呈正態(tài)分布，只是燙傷鼠 PM基態(tài)＊aD］i的分布明顯右移。另外， eLP刺激燙傷小鼠 PM后［Ca及］i升高的峰值C27川2nM，n刁）顯著 高于假燙鼠（207士3l刪，11－398，p＜0．05），而且［Caf“］i升高的峰值與基 態(tài)＊”h之間也呈正相關(guān)（燙傷組：，0．85，p功陰，n＜5；假燙組： 小丑坦扈巨曹匆胞內(nèi)篡在寸宵瀉甫子政友的不均一伎及其和匆胞皿應(yīng)伎的共系－3－ 頂士學(xué)位論文 一中文灼召一 FO．3 5，，p功．01，一65。此兩組實(shí)驗(yàn)均重復(fù)6次人fML P刺激后燙傷 小鼠PM產(chǎn)生O廠水平N刀47切刀3n’細(xì)胞，n－4）也明顯高于假燙小 鼠（0＊38士0＊6／10’細(xì)胞，p＜0＊l，11－4）。 正常小鼠PM中基態(tài)Kd勺i高的細(xì)胞，P肌刺激后生成OZ二也 明顯增多：燙傷小鼠PM基態(tài)［Cd勺i升高、oLP刺激后生成OZ二也 明顯增多，同時(shí)免疫組化的結(jié)果表明PKC－Q的表達(dá)水平也明顯增加。 由此我們想到，燙傷后由于PKC增加，在體外不再給與刺激時(shí)可能 也會(huì)有 OZ‘的生成（暫時(shí)不嚴(yán)格地稱之為“自發(fā)性” OZ二生成人我們 的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了這個(gè)想法，即燙傷小鼠體外生成“自發(fā)性” O廠的 細(xì)胞仁總細(xì)胞數(shù)的 35ti6o，。6）明顯高于假燙組0t2O，n＝6， p刃刀1人我們對(duì)此現(xiàn)象的可能的病理學(xué)意義也作了討論。
【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R364

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 余自強(qiáng),張明水,周家驊,武谷,蔡曉燕,賀學(xué)姣,丁幫勝,舒兆龍;新型鈣熒光指示劑Indo-1測(cè)定淋巴細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的研究[J];白血病;1999年03期

2 朱曉燕,韓建中,婁淑杰,嚴(yán)進(jìn),徐仁寶;小鼠腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)的游離鈣離子濃度及PMA、fMLP反應(yīng)性的不均一性[J];中國(guó)病理生理雜志;2000年10期

3 韓曉紅,蓋曉東,薛延軍;中藥柴胡提取物對(duì)人肝癌細(xì)胞BEL-7402細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響[J];北華大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2004年04期

4 孫青芳,趙衛(wèi)國(guó),張?zhí)戾a,田恒力,張學(xué)新;兔大腦中動(dòng)脈阻斷后腦片細(xì)胞內(nèi)游離鈣的觀察[J];中國(guó)神經(jīng)精神疾病雜志;1996年04期

5 于永春，滕小洪;血漿游離鈣的測(cè)定方法探討[J];鐵道醫(yī)學(xué);1996年02期

6 張孝清,王斌,張民英,肖繼皋;TMB-8對(duì)去甲腎上腺素和BHQ引起新生大鼠單個(gè)腦細(xì)胞內(nèi)游離鈣增高的影響[J];藥學(xué)學(xué)報(bào);1997年10期

7 羅旭日;肖巨慶;譚慶瑜;黃艷;張偉靈;文藝恒;;新生兒缺氧缺血性腦病血漿游離鈣的變化[J];實(shí)用臨床醫(yī)學(xué);2008年07期

8 周潔，黃大有;糖皮質(zhì)激素受體的肝細(xì)胞膜定位及其與胞漿內(nèi)游離鈣的關(guān)系[J];北京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年04期

9 楊志偉，聶玉生，楊福愉;超氧陰離子對(duì)心肌細(xì)胞Ca~（2＋）平衡的影響及硒的保護(hù)作用[J];中國(guó)生物化學(xué)與分子生物學(xué)報(bào);1994年02期

10 劉豐,宣波,張民英,肖繼皋;應(yīng)用Fura－2／AM測(cè)定兔視網(wǎng)膜細(xì)胞內(nèi)游離鈣的方法[J];南京醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1996年06期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王德生;湯穎;蘇志強(qiáng);;亞低溫對(duì)海馬神經(jīng)元內(nèi)游離鈣離子濃度的影響[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

2 阮仕榮;;數(shù)理計(jì)算與化學(xué)燒傷中毒救治[A];第五屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)燒傷后臟器損害的臨床救治論文匯編[C];2007年

3 閔安民;;離子濃度對(duì)森林土壤陽(yáng)離子交換量的影響[A];第九屆中國(guó)青年土壤科學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會(huì)暨第四屆中國(guó)青年植物營(yíng)養(yǎng)與肥料科學(xué)工作者學(xué)術(shù)討論會(huì)論文集[C];2004年

4 ;谷氨酸調(diào)節(jié)耳蝸內(nèi)毛細(xì)胞游離鈣的實(shí)驗(yàn)觀察[A];面向二十一世紀(jì)的生物醫(yī)學(xué)體視學(xué)和軍事病理學(xué)論文摘要匯編[C];2000年

5 牛中奇;閻靜;盧智遠(yuǎn);邵旺田;楊芳;;毫米波對(duì)細(xì)胞膜表面電荷和細(xì)胞內(nèi)外離子濃度的影響[A];21世紀(jì)醫(yī)學(xué)工程學(xué)術(shù)研討會(huì)論文摘要匯編[C];2001年

6 李華靜;賈宏瑛;張小玲;;新型Ca~(2+)指示劑STDBT雙波長(zhǎng)比率法測(cè)定血清中游離鈣[A];中國(guó)化學(xué)會(huì)第十屆膠體與界面化學(xué)會(huì)議論文摘要集[C];2004年

7 李根林;王津津;劉月月;;對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)細(xì)胞實(shí)施藥物保護(hù)的可行性分析[A];中國(guó)神經(jīng)科學(xué)學(xué)會(huì)第六屆學(xué)術(shù)會(huì)議暨學(xué)會(huì)成立十周年慶祝大會(huì)論文摘要匯編[C];2005年

8 李子華;濮梅娟;封洋;朱彬;張國(guó)正;;中國(guó)霧水化學(xué)研究進(jìn)展[A];第十五屆全國(guó)云降水與人工影響天氣科學(xué)會(huì)議論文集（Ⅱ）[C];2008年

9 鄭連叢;葉正茂;程新;;硫酸鹽環(huán)境中硫鋁酸鹽水泥的侵蝕行為[A];中國(guó)硅酸鹽學(xué)會(huì)水泥分會(huì)首屆學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2009年

10 楊棣;謝剛;李榮興;楊大錦;張皓東;;制備高純鋅過(guò)程中電解液體系組成的研究[A];2008年全國(guó)冶金物理化學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議專輯（上冊(cè)）[C];2008年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 傳生;溫水泡米 開水煮飯[N];保健時(shí)報(bào);2006年

2 江西省婺源中學(xué) 方文祥;淺析“溶液中離子濃度大小關(guān)系”[N];學(xué)知報(bào);2011年

3 衣曉峰 李建輝;血液透析對(duì)尿毒癥胸水有效[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2005年

4 劉磊;檢驗(yàn)血鉀的臨床提示[N];農(nóng)村醫(yī)藥報(bào)（漢）;2006年

5 健康時(shí)報(bào)記者 馮麗安;骨折3周內(nèi)別吃鈣片[N];健康時(shí)報(bào);2008年

6 郭艷春 編譯;金屬花瓶 對(duì)鮮花有何危害？[N];中國(guó)花卉報(bào);2005年

7 河南省鄢陵縣第一高級(jí)中學(xué) 鄭德山;溶液中離子濃度大小的比較[N];學(xué)知報(bào);2011年

8 康健;補(bǔ)鈣時(shí)的注意事項(xiàng)（下）[N];保健時(shí)報(bào);2006年

9 雷雨春;飲食能壯骨 疏松早預(yù)防[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2006年

10 ;一水硫酸銅[N];中國(guó)畜牧獸醫(yī)報(bào);2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 朱曉燕;1.糖皮質(zhì)激素受體拮抗劑RU486導(dǎo)致大鼠腹腔巨噬細(xì)胞易感化及其機(jī)制 2.糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)細(xì)胞內(nèi)PKCα蛋白增多的機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

2 程剛;Sim vastatin抑制大鼠血管平滑肌細(xì)胞增殖誘導(dǎo)凋亡及其相關(guān)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[D];浙江大學(xué);2002年

3 John Kwaku Kutor;海馬神經(jīng)細(xì)胞胞內(nèi)鈣離子濃度的檢測(cè)及其在藥物評(píng)價(jià)中的應(yīng)用[D];浙江大學(xué);2004年

4 郭鴻涌;工頻勻強(qiáng)磁場(chǎng)對(duì)正常細(xì)胞和腫瘤細(xì)胞凋亡與增殖影響的研究[D];河北工業(yè)大學(xué);2004年

5 齊新;丁苯酞對(duì)AMPA誘導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞損傷的保護(hù)作用及機(jī)制研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

6 于寶軍;嚴(yán)重?zé)齻聠蝹�(gè)核細(xì)胞內(nèi)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制變化的實(shí)驗(yàn)研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

7 夏光濤;NDGA對(duì)HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞誘導(dǎo)凋亡、凋亡機(jī)制及對(duì)其轉(zhuǎn)移影響的研究[D];山東大學(xué);2004年

8 張如升;三七皂甙和葡聚糖對(duì)心肌損傷的保護(hù)作用[D];南京醫(yī)科大學(xué);2006年

9 高慧;膽酸對(duì)心血管組織的損傷在妊娠期肝內(nèi)膽汁淤積癥胎兒并發(fā)癥發(fā)生機(jī)制中作用的研究[D];華中科技大學(xué);2006年

10 何榮芝;高張鹽水在局灶性腦缺血再灌注損傷中的作用和機(jī)制[D];中南大學(xué);2008年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 朱曉燕;小鼠腹腔巨噬細(xì)胞內(nèi)基態(tài)游離鈣離子濃度的不均一性及其和細(xì)胞反應(yīng)性的關(guān)系[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2001年

2 郭yN;比率熒光光譜儀測(cè)量細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的研究[D];西北大學(xué);2003年

3 劉蕓;鈣粘附蛋白在人類胚泡著床中的作用及其一氧化氮、白介素-1調(diào)控機(jī)制的研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2001年

4 陳瀟斐;電解質(zhì)飲料對(duì)運(yùn)動(dòng)員水鹽代謝影響的研究[D];上海體育學(xué)院;2011年

5 曲壯凱;關(guān)于應(yīng)激性抑郁大鼠模型海馬神經(jīng)元游離鈣含量的研究[D];中國(guó)醫(yī)科大學(xué);2002年

6 高好考;K_（ATP）通道介導(dǎo)的一氧化氮對(duì)心肌細(xì)胞缺氧復(fù)氧損傷保護(hù)作用的研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2004年

7 湯元杰;雄激素對(duì)前列腺癌細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度的影響及其機(jī)制探討[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

8 楊光永;KA0324A離子濃度計(jì)的研究與設(shè)計(jì)[D];昆明理工大學(xué);2005年

9 廖家興;316不銹鋼的臨界點(diǎn)蝕溫度及其離子協(xié)同作用研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

10 史文軍;家兔急性有機(jī)磷中毒死后及酸中毒死后玻璃體液化學(xué)成分的變化趨勢(shì)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2009年

本文編號(hào)：2676604