熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)后HSP70的表達(dá)及其對大鼠肢體缺血再灌注損傷的影響

發(fā)布時(shí)間：2020-05-21 17:27

【摘要】： 【目的】(1)探討大鼠肢體在缺血再灌注損傷過程中熱休克蛋白70(HSP70)表達(dá)情況。(2)探討熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)對肢體缺血再灌注損傷的影響及其作用機(jī)制。(3)為肢體缺血再灌注損傷的臨床治療開辟新的思路。【方法】(1)分別建立大鼠肢體缺血再灌注損傷模型和大鼠熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)模型；(2)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物為體重200～220gSD大白鼠72只，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為三組：①正常對照(Normal Control，NC)組；②缺血再灌注(Ischemia Reperfusion，IR)組；③熱應(yīng)激預(yù)處理后缺血再灌注(Heat Stimulated Pretreatment+Ischemia Reperfusion，HP+IR)組。三組分為四個(gè)時(shí)間點(diǎn)：缺血前1h、缺血再灌注1h、再灌注4h、再灌注12h。(3)應(yīng)用生理多導(dǎo)儀記錄大鼠肛溫、心率等生命體征的變化；應(yīng)用光還原(NBT)法測定SOD活性，硫代巴比妥酸法(TBA)測定MDA的含量；應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀測定血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶(GOT)，乳酸脫氫酶(LDH)兩種酶的含量；(4)應(yīng)用Western blot法測定大鼠肢體腓腸肌內(nèi)HSP70的含量；(5)應(yīng)用光學(xué)顯微鏡觀察大鼠腓腸肌組織學(xué)變化。【結(jié)果】(1)IR組大鼠肛溫測定與對照(NC)組相比缺血前1h和再灌注后12h沒有顯著性差異(P ＞0.05)，再灌注1h和再灌注4h與對照組有顯著性差異(P＜0.05)；HP+IR組大鼠肛溫于缺血前1h、再灌注后1h、再灌注后4h、再灌注后12h與對照組和IR組有顯著性差異(P＜0.05)；(2)NC組、IR組和HP+IR組于缺血前1h血清中ALT、L-LDH的含量無顯著性差異；IR組和HP+IR組于再灌注1h、4h、12h各時(shí)間段血清ALT、L-LDH含量明顯高于正常對照組（P＜ 0．of），并有隨再灌注注時(shí)間延長不斷升高的趨勢；HP＋I(xiàn)R組于再灌注lh、4h、12h血清ALT、L－LDH含量明顯低于m組（P＜0．01）。（3）IR組缺血前 lh與正常對照組血漿中 MDA的含量無顯著性差異，再灌注后lh、4h、12h組的mA含量明顯高于正常對照組（P＜0．01），并有隨再灌注時(shí)間延長不斷升高的趨勢；HP＋I(xiàn)R組缺血前l(fā)h的MDA含量與IR組和正常對照組相比，沒有顯著性差異（P＞0．05），再灌注 lh、4h、12h組的 MDA 含量明顯高于正常對照組（P＜0．01），低于m組（P＜0．01），并有隨再灌注時(shí)間延長不斷升高的趨勢。（4）IR組缺血前l(fā)h與正常對照組血漿中SOD的活性無顯著性差異，再灌注lh、4h、12h組的SOD活性明顯低于正常對照組（P＜0．of），并有隨再灌注時(shí)間延長不斷降低的趨勢：HP＋I(xiàn)R組缺血前l(fā)h的SOD活性與IP組和正常對照組相比沒有顯著性差異叩＞0．05h 再灌注注lh、4h、Eh后的SOD活性明顯低于正常對照組（P＜0．of），高于m組（P＜0．of），并有隨再灌注時(shí)間延長不斷降低的趨勢。（5）正常對照組僅有少量的HSP70表達(dá)，缺血再灌注注后骨骼肌中HSP70表達(dá)量增加，，并隨時(shí)間延長有減少的趨勢；熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)后HSP70的表達(dá)明顯增加，且在缺血前l(fā)h的表達(dá)量最多，并隨時(shí)間延長有減少的趨勢。（6）光鏡觀察（X 400）：HP＋I(xiàn)R組與 IR組相比較，肌細(xì)胞明暗帶較清晰，小血管內(nèi)膜較完整，肌細(xì)胞腫脹減輕。【結(jié) 論】（1）大鼠熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)可以影響其生命體征的變化：大鼠的肛溫在熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)后開始升高，隨著時(shí)間的延長有所下降，但仍高于正常水平；大鼠的心率在熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)后開始加快，并維持于一個(gè)較高的水平；（2）大鼠熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)可使肢體缺血再灌注注后血清中的ALT、L－LDH含量有所降低，提示可一定程度減輕骨骼肌細(xì)胞損傷；（3）大鼠熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)可使肢體缺血再灌注后血清中 MDA含量降低和 SOD活性升高，可以降低肢體缺血再灌注損傷的程度；④HSP70在正常大鼠肢體內(nèi)有基礎(chǔ)表達(dá)：HSP70在大鼠熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)后有大量的表達(dá)八5）大鼠熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)后可以誘導(dǎo)HSP70的大量表達(dá)，而且HSP70的表達(dá)也有一一卜個(gè)過程，一般在缺血前l(fā)h有大量的HSP70表達(dá)，隨著時(shí)間的延長， HSP70的表達(dá)也隨著減少，但在各個(gè)時(shí)間段熱應(yīng)激預(yù)適應(yīng)后HSP70 的表達(dá)量多于單純肢體缺血再灌注后HSP70的表達(dá)量；仰大鼠肢體缺血再灌注后血清中的隊(duì)T、L－LDH增加，測定隊(duì)T、L－LDH 含量可作為觀察肌細(xì)胞損傷的敏感指標(biāo)：（7）測定肢體缺血后mA 含量和 SOD活性可以反映肢體缺血再灌注損傷的程度。
【圖文】：

骨骼肌,辣根,缺血再灌注