發(fā)布時(shí)間：2020-05-20 19:59

【摘要】：目的 本文通過(guò)建立骨質(zhì)疏松模型，觀察去勢(shì)后隨時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠脛骨形態(tài)計(jì)量學(xué)改變，體外培養(yǎng)的骨髓基質(zhì)細(xì)胞(BMSCs)IL-1，IL-6，TGF-β，TNF-α mRNA表達(dá)以及上清液中IL-1β和NO濃度改變，探討以下問(wèn)題： (1)雌激素缺乏對(duì)原發(fā)性骨質(zhì)疏松的影響，骨質(zhì)疏松發(fā)病過(guò)程中，骨吸收參數(shù)與骨形成參數(shù)的變化 (2)體外培養(yǎng)的BMSCs能否表達(dá)IL-1，IL-6，TGF-β和TNF-α mRNA (3)絕經(jīng)年限對(duì)BMSCs IL-1，IL-6，TGF-β和TNF-α mRNA表達(dá)的影響 (4)NO濃度改變與骨質(zhì)疏松之間的關(guān)系 方法 將56只4月齡雌性Wistar大鼠隨機(jī)分為6組：假切1月組(Ⅰ組)，假切4月組(Ⅱ組)；去勢(shì)1月組(Ⅲ組)，去勢(shì)4月組(Ⅳ組)，去勢(shì)7月組(Ⅴ組)，去勢(shì)12月組(Ⅵ組)，每組8只。各組大鼠分別于實(shí)驗(yàn)?zāi)⿺囝i處死，取左側(cè)脛骨，新鮮分離骨髓細(xì)胞，靜置貼壁法體外培養(yǎng)BMSCs 13天后，吸取上清液。采用原位雜交(ISH)方法分析IL-1，IL-6，TGF-β和TNF-α在去勢(shì)大鼠不同時(shí)期BMSCs表達(dá)情況；酶聯(lián)免疫吸附(ELISH)法測(cè)定上清液中IL-1β濃度；NO濃度含量檢測(cè)采用硝酸還原酶法。取右側(cè)脛骨制備不脫鈣的骨切片，甲苯胺藍(lán)染色后，行骨組織形態(tài)計(jì)量學(xué)觀察。 結(jié)果 (1)去勢(shì)后隨時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠脛骨骨小梁體積逐漸減少。與假切1月組相比，在去勢(shì)1、4、7、12月后小梁骨占骨髓腔的體積百分比(BV／TV％)分別減少3.13％(P＞0.05)，24.11％(P＜0.05)，42.73％(P＜0.01)，64.93％(P＜0.01)；初級(jí)骨小梁占骨髓腔的體積百分比(PBV／TV％)分別減少3.73％(P＞0.05)，20.12％(P＜0.01)，60.78％(P＜0.01)，74.04％(P＜0.01) (2)去勢(shì)后各組大鼠成骨參數(shù)降低。與假切1月組相比，在去勢(shì)1、4、7、12月后類骨質(zhì)占骨髓腔的體積百分比(OV／BV％)分別減少7.02％(P＞ 天津市自然科學(xué)基金項(xiàng)目NO 003606711天津醫(yī)科大學(xué)碩士研究生論文 0.05)，66.67%(P0.01)，57.89%(P(0.01)，8070%(P(0.01):類骨質(zhì) 占骨小梁的體積百分比(Ov叮BV%)分別減少2.550，0(P0.05)，61620;0(P 0.01)，39.85%(p0.05)，32.84%(p.05);成骨細(xì)胞表面(Ob.S忍S%) 分別減少35.39%，，58.67%，49.25%，31.97%，且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01); 類骨質(zhì)表面(05忍50，0)分別減少30.450，0(P0.05)，65.000，0(P0.02)，36.420，0 (P0.05)，91.84%(P0.01)。去勢(shì)4月組與假切4月組各成骨指數(shù)改變 無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 (3)與假切組相比，去勢(shì)組破骨細(xì)胞數(shù)和吸收表面等骨吸收參數(shù)增加 (4)體外培養(yǎng)的BMSCs可大致分為梭形和扁圓型兩種類型，IL一1、IL一6、 TGF一p和TNF一Q mRNA在這兩種細(xì)胞的原位雜交中均呈陽(yáng)性表達(dá):去勢(shì) 后，IL一1、幾一6和TN下一a mRNA在扁圓型細(xì)胞的表達(dá)增強(qiáng)，并隨時(shí)間的延 長(zhǎng)有升高趨勢(shì)，而TGF一p mRNA的表達(dá)則相反 (5)與假切組相比，去勢(shì)后BMSCs上清液中IL-lp濃度降低，與假切1 月組相比，假切4月大鼠BMSCs上清液中IL一lp濃度亦降低 (6)去勢(shì)后，BMSCs上清液中NO濃度含量下降，而去勢(shì)1、4、7和12月 組NO濃度改變無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義 結(jié)論: (l)去勢(shì)后隨時(shí)間的延長(zhǎng)，大鼠骨質(zhì)丟失的比例和數(shù)量越來(lái)越嚴(yán)重，由雌 激素缺乏引起的骨質(zhì)疏松的發(fā)病過(guò)程中，破骨細(xì)胞數(shù)、吸收表面等骨的吸收 參數(shù)增加，但類骨質(zhì)表面、成骨細(xì)胞表面等成骨參數(shù)降低，引起骨的形成與 吸收脫偶聯(lián)而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生 (2)IL一1，幾·6，TGF一p和TNF·a mRNA均能在體外培養(yǎng)的BMSCs胞 漿中表達(dá);去勢(shì)后機(jī)體BMSCs表達(dá)IL一1，IL一6和TNF一Q能力增強(qiáng)，并隨 去勢(shì)后時(shí)間的延長(zhǎng)有增高趨勢(shì)，而表達(dá)TGF一p的情況卻相反 (3)雌激素缺乏后，BMSCs合成和分泌NO功能顯著降低，NO作為一種 信使分子，在低濃度情況下能增強(qiáng)骨質(zhì)的吸收，而導(dǎo)致骨質(zhì)疏松的發(fā)生
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R361

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本文編號(hào)：2673122