【摘要】：成纖維細(xì)胞是結(jié)締組織中數(shù)量最多的固有細(xì)胞，其增殖及前膠原基因表達(dá)等功能狀態(tài)直接影響損傷修復(fù)的結(jié)局。缺氧是在損傷修復(fù)過程中影響成纖維細(xì)胞上述功能的重要環(huán)境因素。本文以體外培養(yǎng)的人胚肺成纖維細(xì)胞為靶細(xì)胞，以缺氧(2％O_2)為刺激因素，從細(xì)胞、蛋白分子、mRNA、離子水平探討了缺氧對人胚肺成纖維細(xì)胞增殖，Ⅰ、Ⅲ型前膠原基因表達(dá)的影響及其機(jī)制，為闡明炎癥、抗炎、損傷、修復(fù)的普遍機(jī)制提供實驗依據(jù)。 一．人胚肺成纖維細(xì)胞的培養(yǎng)及鑒定、人胚肺成纖維細(xì)胞缺氧(2％O_2)模型的建立及缺氧對該細(xì)胞損傷作用的評價 組織塊法原代培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞，用光鏡、透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)、計數(shù)細(xì)胞接種存活率和免疫細(xì)胞化學(xué)的方法對所培養(yǎng)的細(xì)胞進(jìn)行鑒定。復(fù)制人胚肺成纖維細(xì)胞缺氧(2％O_2)模型。用光鏡、透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)，瓊脂糖凝膠電泳檢測細(xì)胞DNA完整性，計數(shù)細(xì)胞接種存活率檢測細(xì)胞生長狀態(tài)等指標(biāo)評價缺氧(2％O_2)對該細(xì)胞的損傷作用程度。缺氧(2％O_2)作用下的人胚肺成纖維細(xì)胞的光鏡下形態(tài)、細(xì)胞接種存活率無明顯改變、電鏡下超微結(jié)構(gòu)除內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張外無明顯改變、基因組DNA無降解，證實缺
【圖文】：

圖b1第6代人胚肺成纖維細(xì)胞(x100)2.電鏡下細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)電鏡下細(xì)胞形態(tài)如圖2，可見細(xì)胞胞體輪廓清楚，呈不規(guī)則星形且具有許多突起。細(xì)胞核為橢圓形，約占胞體的2/3，常染色質(zhì)較多，核仁明顯。細(xì)胞質(zhì)較豐富，內(nèi)含許多粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)，高爾基復(fù)合體和一些游離核糖體。圖2人胚肺成纖維細(xì)胞電鏡下超微結(jié)構(gòu)(X5O00)

陽性對照組人胚肺成纖維細(xì)胞株胞漿內(nèi)彌漫陽性染色，證明抗成纖維細(xì)胞表面蛋白單克隆抗體是抗成纖維細(xì)胞表面蛋白的特異抗體(圖3)a。實驗組第6代培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞胞漿內(nèi)彌漫強(qiáng)陽性染色(圖3b)。陰性對照組第6代培養(yǎng)人胚肺成纖維細(xì)胞胞漿染色陰性(圖3)c。此外，在陰性對照組中，，觀察到了典型的細(xì)胞核分裂相，細(xì)胞處于分裂后期，也表明人胚肺成纖維細(xì)胞生長狀態(tài)良好。圖3a免疫細(xì)胞化學(xué)染色:陽性對照組(X400)
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1998
【分類號】：R363

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本文編號：2665694