【摘要】： 基因治療是將外源性基因?qū)肽康募毎⒂行П磉_來補充或替代體內(nèi)基因缺陷或不足治療人類疾病的治療方法。基因轉(zhuǎn)導(dǎo)是基因治療成敗的關(guān)鍵。涎腺的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)研究是當今涎腺研究領(lǐng)域中的高、新、尖研究內(nèi)容。通過基因轉(zhuǎn)導(dǎo)到唾液腺具有治療唾液腺本身疾病、口腔疾病及全身系統(tǒng)性疾病的臨床應(yīng)用前景。有關(guān)涎腺基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究，目前尚處于動物實驗階段，國內(nèi)尚未開展此項研究。本研究目的是通過將腺病毒介導(dǎo)的熒光素酶基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至Wistar大鼠頜下腺，建立涎腺基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法并探討基因表達規(guī)律及轉(zhuǎn)導(dǎo)后腺體組織結(jié)構(gòu)的變化，從而為今后涎腺疾病的基因治療打基礎(chǔ)。 本研究主要分為兩大部分 1．基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究 材料和方法：取正常健康純系、8～10周的Wistar大鼠40只。所有的動物通過肌注3％戊巴比妥(1mg／kg)麻醉。在病毒感染前肌注阿托品(0.5mg／kg)目的是減少唾液的流率。病毒懸浮于稀釋的緩沖液，用塑料軟管插入頜下腺導(dǎo)管約5mm深，按轉(zhuǎn)導(dǎo)熒光素酶基因后3天、1周、2周、1個月及2個月將40只動物隨機分為5組，每組8只。每組中3只導(dǎo)入10~8pfu的AdCMVLuc／50ul／腺體，同時肌注地塞米松，按1mg／每只／天，連續(xù)注射3天；3只導(dǎo)入10~8pfu AdCMVLuc／50ul／腺體，不肌注地塞米松；2只導(dǎo)入病毒稀釋緩沖液50ul作為對照組。 山西醫(yī)科大學(xué)祠眨士庵開究生畢3匕論文 在不同時點取大鼠領(lǐng)下腺檢測熒光素酶活性。結(jié)果:大鼠領(lǐng)下腺有明顯 熒光素酶基因表達，基因表達隨時間推移逐漸下降，至1周時表達接 近本底。在轉(zhuǎn)基因后3天一1周，地塞米松組其基因表達明顯高于未注 射地塞米松組，在其他時間點兩者無顯著差異性，，表明地塞米松在1 周之內(nèi)能增加轉(zhuǎn)基因在領(lǐng)下腺表達。 2.基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后腺體組織結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)變化。 材料和方法:同前一部分大鼠，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后在取領(lǐng)下腺檢測熒光素 酶的同時取領(lǐng)下腺進行組織病理及超微病理觀察。結(jié)果:兩周內(nèi)腺體炎 癥反應(yīng)較重，小葉內(nèi)、小葉間導(dǎo)管旁淋巴細胞呈灶狀浸潤。2周以后炎 癥反應(yīng)減輕，僅在小葉間、小葉內(nèi)血管旁可見少量淋巴細胞、漿細胞、 嗜酸細胞，腺泡分泌管未見異常改變。4周左右腺體逐漸恢復(fù)正常。超 微結(jié)構(gòu)變化:注入基因后3天，腺泡和導(dǎo)管細胞內(nèi)可見大量粗面內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)，粘液腺泡中粘液滴增多，融合成片。腺腔內(nèi)的微絨毛較少，腺腔 內(nèi)有中等電子密度塊狀物。1周后，導(dǎo)管腔的微絨毛突起減少，胞漿內(nèi) 可見線粒體顯著增多。腺腔表面缺乏微絨毛突起。細胞間隙加寬。間 質(zhì)中血管擴張。2周，腺泡腔可見少量的微絨毛突起及細絲網(wǎng)狀物。粘 液腺泡中可見粘液滴�；撞靠梢姶置鎯�(nèi)質(zhì)網(wǎng)，基底膜增厚，有的部 位為雙層。4周，腺泡腔面可見微絨毛突起，細胞的微絨毛突起減少。 結(jié)論:腺病毒介導(dǎo)的熒光素酶基因能成功轉(zhuǎn)導(dǎo)至Wistar大鼠領(lǐng)下 腺并表達，其轉(zhuǎn)導(dǎo)表達隨時間而逐漸減弱，地塞米松能增加腺病毒介 導(dǎo)涎腺短期基因表達。腺病毒介導(dǎo)的熒光素酶基因轉(zhuǎn)導(dǎo)引起腺體明顯 炎癥反應(yīng)，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后腺體炎癥反應(yīng)在兩周內(nèi)最重，4周左右恢復(fù)正 常。腺病毒介導(dǎo)的熒光素酶基因表達與腺體炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。本研 究首次研究了大鼠領(lǐng)下腺基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后超微病理變化，發(fā)現(xiàn)細胞內(nèi)粗面 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯增多，提示可能與基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后蛋白合成較旺盛有關(guān)。
【圖文】：

基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后2周，見淋巴細胞呈灶性浸潤(HE10x40)

導(dǎo)入2周，小葉內(nèi)、小葉間導(dǎo)管旁淋巴細胞呈灶狀浸潤
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R346

【共引文獻】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 范家喬;腹腔巨噬細胞在急性出血壞死性胰腺炎病程演變中的作用的實驗研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號：2656976