發(fā)布時(shí)間：2020-05-10 07:41

【摘要】： 基因治療是將外源性基因?qū)肽康募?xì)胞并有效表達(dá)來補(bǔ)充或替代體內(nèi)基因缺陷或不足治療人類疾病的治療方法。基因轉(zhuǎn)導(dǎo)是基因治療成敗的關(guān)鍵。涎腺的基因轉(zhuǎn)導(dǎo)研究是當(dāng)今涎腺研究領(lǐng)域中的高、新、尖研究內(nèi)容。通過基因轉(zhuǎn)導(dǎo)到唾液腺具有治療唾液腺本身疾病、口腔疾病及全身系統(tǒng)性疾病的臨床應(yīng)用前景。有關(guān)涎腺基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究，目前尚處于動(dòng)物實(shí)驗(yàn)階段，國內(nèi)尚未開展此項(xiàng)研究。本研究目的是通過將腺病毒介導(dǎo)的熒光素酶基因轉(zhuǎn)導(dǎo)至Wistar大鼠頜下腺，建立涎腺基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的方法并探討基因表達(dá)規(guī)律及轉(zhuǎn)導(dǎo)后腺體組織結(jié)構(gòu)的變化，從而為今后涎腺疾病的基因治療打基礎(chǔ)。 本研究主要分為兩大部分 1．基因轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究 材料和方法：取正常健康純系、8～10周的Wistar大鼠40只。所有的動(dòng)物通過肌注3％戊巴比妥(1mg／kg)麻醉。在病毒感染前肌注阿托品(0.5mg／kg)目的是減少唾液的流率。病毒懸浮于稀釋的緩沖液，用塑料軟管插入頜下腺導(dǎo)管約5mm深，按轉(zhuǎn)導(dǎo)熒光素酶基因后3天、1周、2周、1個(gè)月及2個(gè)月將40只動(dòng)物隨機(jī)分為5組，每組8只。每組中3只導(dǎo)入10~8pfu的AdCMVLuc／50ul／腺體，同時(shí)肌注地塞米松，按1mg／每只／天，連續(xù)注射3天；3只導(dǎo)入10~8pfu AdCMVLuc／50ul／腺體，不肌注地塞米松；2只導(dǎo)入病毒稀釋緩沖液50ul作為對(duì)照組。 山西醫(yī)科大學(xué)祠眨士庵開究生畢3匕論文 在不同時(shí)點(diǎn)取大鼠領(lǐng)下腺檢測(cè)熒光素酶活性。結(jié)果:大鼠領(lǐng)下腺有明顯 熒光素酶基因表達(dá)，基因表達(dá)隨時(shí)間推移逐漸下降，至1周時(shí)表達(dá)接 近本底。在轉(zhuǎn)基因后3天一1周，地塞米松組其基因表達(dá)明顯高于未注 射地塞米松組，在其他時(shí)間點(diǎn)兩者無顯著差異性，，表明地塞米松在1 周之內(nèi)能增加轉(zhuǎn)基因在領(lǐng)下腺表達(dá)。 2.基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后腺體組織結(jié)構(gòu)和超微結(jié)構(gòu)變化。 材料和方法:同前一部分大鼠，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后在取領(lǐng)下腺檢測(cè)熒光素 酶的同時(shí)取領(lǐng)下腺進(jìn)行組織病理及超微病理觀察。結(jié)果:兩周內(nèi)腺體炎 癥反應(yīng)較重，小葉內(nèi)、小葉間導(dǎo)管旁淋巴細(xì)胞呈灶狀浸潤。2周以后炎 癥反應(yīng)減輕，僅在小葉間、小葉內(nèi)血管旁可見少量淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、 嗜酸細(xì)胞，腺泡分泌管未見異常改變。4周左右腺體逐漸恢復(fù)正常。超 微結(jié)構(gòu)變化:注入基因后3天，腺泡和導(dǎo)管細(xì)胞內(nèi)可見大量粗面內(nèi)質(zhì) 網(wǎng)，粘液腺泡中粘液滴增多，融合成片。腺腔內(nèi)的微絨毛較少，腺腔 內(nèi)有中等電子密度塊狀物。1周后，導(dǎo)管腔的微絨毛突起減少，胞漿內(nèi) 可見線粒體顯著增多。腺腔表面缺乏微絨毛突起。細(xì)胞間隙加寬。間 質(zhì)中血管擴(kuò)張。2周，腺泡腔可見少量的微絨毛突起及細(xì)絲網(wǎng)狀物。粘 液腺泡中可見粘液滴�；撞靠梢姶置鎯�(nèi)質(zhì)網(wǎng)，基底膜增厚，有的部 位為雙層。4周，腺泡腔面可見微絨毛突起，細(xì)胞的微絨毛突起減少。 結(jié)論:腺病毒介導(dǎo)的熒光素酶基因能成功轉(zhuǎn)導(dǎo)至Wistar大鼠領(lǐng)下 腺并表達(dá)，其轉(zhuǎn)導(dǎo)表達(dá)隨時(shí)間而逐漸減弱，地塞米松能增加腺病毒介 導(dǎo)涎腺短期基因表達(dá)。腺病毒介導(dǎo)的熒光素酶基因轉(zhuǎn)導(dǎo)引起腺體明顯 炎癥反應(yīng)，基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后腺體炎癥反應(yīng)在兩周內(nèi)最重，4周左右恢復(fù)正 常。腺病毒介導(dǎo)的熒光素酶基因表達(dá)與腺體炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。本研 究首次研究了大鼠領(lǐng)下腺基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后超微病理變化，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)粗面 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯增多，提示可能與基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后蛋白合成較旺盛有關(guān)。
【圖文】：

基因轉(zhuǎn)導(dǎo)后2周，見淋巴細(xì)胞呈灶性浸潤(HE10x40)

導(dǎo)入2周，小葉內(nèi)、小葉間導(dǎo)管旁淋巴細(xì)胞呈灶狀浸潤
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號(hào)】：R346

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 范家喬;腹腔巨噬細(xì)胞在急性出血壞死性胰腺炎病程演變中的作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];大連醫(yī)科大學(xué);2005年

本文編號(hào)：2656976