【摘要】： 在胚胎發(fā)育時(shí)期，無論是胎肝造血還是骨髓造血，巨核細(xì)胞形態(tài)均較小， 直到出生后幾個(gè)月，仍小于成人的巨核細(xì)胞。我們以往的研究發(fā)現(xiàn)盡管胎肝巨 核細(xì)胞DNA倍性隨胎齡的增加而增加，但直到出生前其DNA倍性仍低于成人。 這似乎提示胚胎發(fā)育時(shí)期巨核細(xì)胞的核內(nèi)復(fù)制和DNA倍體化出現(xiàn)發(fā)育延遲或 阻滯。體外研究表明與成人巨核細(xì)胞祖細(xì)胞相比，胎兒的巨核細(xì)胞祖細(xì)胞可產(chǎn) 生較多的巨核細(xì)胞，這些細(xì)胞形態(tài)上仍較小，且DNA倍性也低于成人骨髓源巨 核細(xì)胞。該結(jié)果提示胎兒巨核細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制的延遲可能與其祖細(xì)胞的內(nèi)在修飾 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士論文 論文摘要 特征有關(guān)。然而，胎）［巨核細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制延遲的機(jī)制目前尚不清楚。 一些研究發(fā)現(xiàn)周期蛋白和CDK在巨核細(xì)胞核內(nèi)有絲分裂的調(diào)控上起重要 作用，然而，周期蛋白和 CDK在胎兒巨核細(xì)胞核內(nèi)有絲分裂調(diào)控上所起的作用，， 及其與胎兒巨核細(xì)胞核內(nèi)復(fù)制延遲的關(guān)系目前全然不知。這一方面是由于骨髓 中巨核細(xì)胞含量極少，相對來說胎兒體內(nèi)含量則更少，要獲得大量巨核細(xì)胞極 為困難。另一方面，在以往所建立的巨核細(xì)胞培養(yǎng)體系中，大多使用的是復(fù)合 細(xì)胞因子，細(xì)胞不但可以向巨核細(xì)胞分化，也可以向其它造血細(xì)胞分化，而且， 體系中巨核細(xì)胞的含量低，成熟程度也低。因此，很難獲得足夠量的細(xì)胞進(jìn)行 進(jìn)一步研究。另外，由于在復(fù)合細(xì)胞因子中，有些細(xì)胞因子怕 IL七，GM｛SF 等）可以通過刺激輔助細(xì)胞產(chǎn)生其它的細(xì)胞因子刺激巨核細(xì)胞的增殖，在這樣 體系中獲得的巨核細(xì)胞增殖分化特性的結(jié)果部分是由于間接調(diào)節(jié)作用所引起。 近年來由于仆 的成功克隆表達(dá)和造血干細(xì)胞分離技術(shù)的完善，使進(jìn)行這方面 的研究成為可能。 本文首先建立了胎肝CD34”細(xì)胞巨核細(xì)胞培養(yǎng)體系，對胎肝巨核細(xì)胞祖細(xì) 胞的增殖分化特征及與細(xì)胞周期調(diào)控的關(guān)系進(jìn)行了探索，為進(jìn)一步的研究奠定 了基礎(chǔ)。 在本項(xiàng)研究中，我們采用免疫磁珠分離人胎肝和成人骨髓CD34”細(xì)胞，并 建立w 誘導(dǎo)下的巨核細(xì)胞體外培養(yǎng)體系。觀察該體系中CD41＋細(xì)胞的細(xì)胞數(shù)， 形態(tài)學(xué)特征，表型特征，成熟程度和DNA倍性的變化，以了解CD34”細(xì)胞在含 有P 的巨核細(xì)胞體外培養(yǎng)體系中增殖分化的特點(diǎn)。在此基礎(chǔ)上，分析了周期 蛋白表達(dá)的變化，以了解周期蛋白在巨核細(xì)胞增殖分化過程中所起的作用。結(jié) 果發(fā)現(xiàn)：（1）經(jīng) 12d培養(yǎng)后，TPO使胎肝源 CD34“細(xì)胞從 IX 10’個(gè)細(xì)胞加 增 加到 13．09士 3．06 X 10‘個(gè)細(xì)胞加1，CD41＋細(xì)胞數(shù)平均增加了 73．14倍；而骨髓 源 CD34”細(xì)胞只增加到 1．31士0回 15 X 10‘個(gè)細(xì)胞／ml，CD41“細(xì)胞數(shù)平均增加了 8．18倍； －6－ 第四軍醫(yī)大學(xué)碩士論文 論文摘要 u）盡管骨髓＠ CD34”細(xì)胞to胎n＠ CD34”細(xì)胞表z血小板特異性抗原 CD41a， CD42a，CD61和造血干細(xì)胞抗原 CD34的免疫表型相同，但幾乎所有胎肝 CD34” 源巨核細(xì)胞都處在成熟分期的 I和 11期，DNA倍性＄4N。而在骨髓CD34”源巨 核細(xì)胞中，15％巨核細(xì)胞處于成熟分期的工＊和IV期，23％巨核細(xì)胞DNA倍性 乃N；u）經(jīng)12d培養(yǎng)后，大多數(shù)培養(yǎng)的胎肝源CD34”細(xì)胞沒有發(fā)育完善的界 膜系統(tǒng)（DM）和 a－顆粒；（4）vWF在培養(yǎng)骨髓源 CD34”細(xì)胞上的表達(dá)早于在胎 肝源 CD34”細(xì)胞上；（5）在整個(gè)培養(yǎng)期間，周期蛋白 E和 BI在胎肝源 CD34“ 細(xì)胞上的表達(dá)逐漸增加，并保持在一個(gè)高水平上，在培養(yǎng)的后期，高水平的周 期蛋白 BI出現(xiàn)在 GI期細(xì)胞上；（6）周期蛋白 DI和 D3在胎肝源 CD34”細(xì)胞上 的表達(dá)，培養(yǎng)初期增加，培養(yǎng)后期下降；（）免疫組化染色分析顯示，僅在胎 肝CD34”源巨核細(xì)胞的胞漿中檢測到周期蛋白D3的表達(dá)，而在骨髓CD34”源巨 核細(xì)胞的胞漿和細(xì)胞核內(nèi)均可檢測到周期蛋白 D3的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示門） 胎肝CD34”細(xì)胞中含有高比例更原始巨核細(xì)胞祖細(xì)胞；（2） TPO可通過上調(diào)周 期蛋白 BI和 E表達(dá)，促使巨核細(xì)胞祖細(xì)胞進(jìn)入增殖狀態(tài)，同時(shí)伴隨著向巨核 系的分化；（3）周期蛋白 DI和 D3在巨核細(xì)胞分化后期表達(dá)下降，周期蛋白 D3的核外表達(dá)及周期蛋白BI在0期細(xì)胞上的表達(dá)可能與胎肝CD34”源巨核細(xì) 胞延遲進(jìn)入核內(nèi)有絲分裂有關(guān)。
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R392.12

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2656277