【摘要】：目的：應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，制備分泌抗鼠疫桿菌F1抗原單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，讓其持續(xù)性產(chǎn)生F1單克隆抗體，為建立鼠疫的快速診斷方法提供抗體源。 方法：用鼠疫桿菌的特異成分F1抗原免疫6～8周齡、健康的雌性BALB／c小鼠，然后檢測小鼠血清中的F1抗體效價(jià)，選抗體滴度最高的小鼠用于細(xì)胞融合，融合前三天用100μg F1抗原腹腔注射加強(qiáng)免疫一次，然后取其脾臟細(xì)胞與處于對數(shù)生長期的SP2／0骨髓瘤細(xì)胞混合后，50％的PEG作為細(xì)胞融合劑，，融合后的細(xì)胞用HAT培養(yǎng)液接種于96孔細(xì)胞培養(yǎng)板中進(jìn)行選擇培養(yǎng)，用間接ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中的F1抗體，篩選出的F1抗體陽性雜交瘤細(xì)胞，用有限稀釋法進(jìn)行克隆，經(jīng)過四次克隆化后獲得了能穩(wěn)定分泌F1單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株。 結(jié)果：經(jīng)過13次的細(xì)胞融合試驗(yàn)后，獲得了三株能穩(wěn)定分泌F1單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞株，分別命名為IV1B_(12)、IV2C_(10)和IV2C_6，用間接ELISA法檢測其培養(yǎng)上清液中的F1單克隆抗體，F(xiàn)1抗體滴度分別為IV1B_(12) 1：1280～1：10240、IV2C_(10) 1：2560～1：10240和IV2C_6 1：5120～1：10240。 結(jié)論：應(yīng)用雜交瘤技術(shù)，成功制備了三株能穩(wěn)定分泌抗鼠疫桿菌F1抗原的單克隆抗體雜交瘤細(xì)胞株，為進(jìn)一步建立鼠疫快速診斷技術(shù)奠定了堅(jiān)實(shí)的基礎(chǔ)，同時(shí)也基本建立了雜交瘤技術(shù)的實(shí)驗(yàn)程序。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R392.1

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2652216