發(fā)布時間：2020-05-07 02:38

【摘要】：目的：為證明慢性肉芽腫性炎的抗腫瘤性，旨在摸索建立出在機(jī)體內(nèi)持久保持的慢性肉芽腫性炎的動物模型，并對其抗腫瘤性進(jìn)行了初步探討研究。 方法：進(jìn)行動物實(shí)驗(yàn)制造模型，實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行。 1.大鼠慢性肉芽腫性炎模型的建立 研究中采用256只正常成年Wistar大鼠，雌雄各半。麻醉后，無菌操作在肝右葉膈面分別注射0.1ml藥物。其中正常對照組大鼠36只，注射藥物分別為C1、C4組：0.1mMPBS；C2、C5組：10㳠明膠(PBS配制)；C3、C6組：25㳠P407(PBS配制)。模型組220只，注射藥物分別為M1、M6組：BCG原液；M2、M7組：BCG原液與10㳠明膠1∶1混合液；M3、M9組：2mlBCG原液與0.5g P407混合液；M4、M10組：破壁的靈芝孢子粉溶液(0.2g+1mlPBS)； M5、M11組：未破壁的靈芝孢子粉溶液(0.2g+2mlPBS)；M8組：前4周同M1組， 4周時以相同劑量在原部位加強(qiáng)一次。各模型組在肝內(nèi)造模后，均以相同藥物，相同劑量在右前肢皮下注射。術(shù)后4周，將C1、C2、C3和M1、M2、M3、M4、M5組大鼠脫頸處死；術(shù)后8周，將C4、C5、C6和M6、M7、M8、M9、M10、M11組大鼠脫頸處死。處死大鼠取肝右葉，觀察肝右葉的形態(tài)學(xué)變化，重點(diǎn)取材結(jié)節(jié)形成部位及與周圍肝組織交界處。同時取右前肢原注射部位的皮膚及皮下組 WP=4 織。取材組織常規(guī)石蠟切片，行HE染色與抗溶菌酶和CD20的免疫組織化學(xué)染色。 2.肉芽腫性炎抗腫瘤的初步觀察 取斷奶Wistar雄性大鼠1只，體重50g，將Walker-256瘤株直接注入大鼠腹腔。一周后大鼠出現(xiàn)癌性腹水后，抽出癌性腹水。取體重150-200gWistar大鼠48只分成8組，每組大鼠右前肢皮下注射癌性腹水0.1ml造成皮下腫瘤模型。于造模后第3天分別在腫瘤內(nèi)注射藥物0.1ml，注射藥物分別為T1、T5組：同M1組；T2、T6組：同M2組；T3、T7組：同M3組；T4、T8組：不給任何藥物。 造模后7天，將T1、T2、T3、T4組大鼠脫頸處死；造模后14天，將T5、T6、T7、T8組大鼠脫頸處死。處死的大鼠取新鮮胸腺組織，行胸腺細(xì)胞增殖和凋亡的FCM檢測，并取皮下腫瘤常規(guī)制備石蠟切片行HE染色，光鏡觀察腫瘤內(nèi)的形態(tài)變化。 結(jié)果：在造模期間，大鼠體重正常增長，大鼠的行為、活動及食欲也無明顯異常。 1.病理形態(tài)學(xué)觀察 各正常對照組肝內(nèi)和皮下均無明顯形態(tài)學(xué)改變，各模型組肝內(nèi)和皮下均有結(jié)節(jié)形成。M1、M2、M3、M6、M7、M8和M9組形成的是結(jié)核樣肉芽腫性炎，結(jié)節(jié)內(nèi)可見到多少不等的上皮樣細(xì)胞和Langhans巨細(xì)胞及炎細(xì)胞，并可見到少量干酪樣壞死，結(jié)節(jié)周圍伴有程度不等的纖維化。M4、M5、M10和M11組形成的異物肉芽腫性炎，且炎癥內(nèi)壞死多，范圍大。就持久性而言，，不管是在肝內(nèi)還是皮下，BCG結(jié)合P407刺激機(jī)體產(chǎn)生的慢性肉芽腫性炎8周后纖維化程度仍 WP=5 然較低，顯示良好的持久性。 T1、T3組可見到腫瘤細(xì)胞壞死和炎細(xì)胞浸潤。T5組仍可見到腫瘤細(xì)胞壞死及炎細(xì)胞，與T1組相比，腫瘤周圍可見到纖維組織增生并包裹腫瘤。T7組與T3組相比，腫瘤邊緣可見明顯纖維化及多量炎細(xì)胞。 2.免疫組織化學(xué)染色 各模型組溶菌酶染色均為陽性。M9組的陽性部位面積大于M3組，平均灰度無顯著差異。陽性部位面積M2、M3、M4、M5組均大于M1組，M5組大于M4組，M9組大于M6及M7組，其余各組間無顯著差異；而平均灰度除了M1組大于M2、M4組外，其余各組間均無顯著差異。各模型組CD20染色均為陽性，各組之間的陽性率均無顯著差異。 3.流式細(xì)胞定量檢測 FCM檢測造模后7天時，胸腺細(xì)胞凋亡率 T2組最高，T3組最低，T1組、T4組無顯著差異，而增殖指數(shù)T1組最高，T3組次之，T2組、T4組之間無顯著差異；造模后14天時，胸腺細(xì)胞凋亡率T6組最高，T7組最低，T5組高于T8組，而增殖指數(shù)T7組最高，T8組最低，T6組高于T5組。 結(jié)論 1．各模型組均成功建立了慢性肉芽腫性炎模型。 2．在本研究所選各模型組中持久性最好的是BCG與P407結(jié)合組。 3．P407與細(xì)菌結(jié)合，不影響細(xì)菌的功能，是很好的緩釋劑。 4．各組慢性肉芽中性炎模型中，B細(xì)胞的表達(dá)無明顯差異。 5．BCG所致慢性肉芽腫性炎有抗腫瘤作用。 WP=6
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R-332

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2652292