發(fā)布時間：2020-05-04 21:03

【摘要】：在諸多疾病如哮喘、心肌梗死等過程中,都存在急性炎癥反應(yīng),對機體的損害較大。因此,尋找一種有效的抗炎方法,對于降低炎癥反應(yīng)造成的損害是十分重要的。炎癥反應(yīng)過程是選擇素家族成員與其糖基化的配體相互作用的結(jié)果。選擇素家族有三個成員,P(Platelet)-, E(Endothelium)-,L(Leukocyte)-選擇素。其中,E-選擇素在炎癥部位的內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)。E-選擇素通過其C型凝集素結(jié)構(gòu)域同白細(xì)胞糖脂和糖蛋白上的寡糖唾液酸化的路易斯X(sLeX)結(jié)合,介導(dǎo)白細(xì)胞(中性粒細(xì)胞,單核細(xì)胞和CD4+記憶細(xì)胞)在內(nèi)皮細(xì)胞表面最初的滯留和滾動,以及隨后遷移到炎癥組織。因此,E-選擇素及其糖基配體的拮抗物,能夠抑制白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞發(fā)生粘附,起到抑制炎癥的作用。 某些與特定寡糖空間構(gòu)象類似的肽稱為寡糖模擬肽。利用寡糖的單克隆抗體,從隨機的肽文庫中篩選出與之結(jié)合力較強的肽序列作為該寡糖的模擬肽。寡糖與其模擬肽兩者在空間構(gòu)象上的相似性決定了兩者在功能上也存在著相似性,即寡糖模擬肽應(yīng)能與寡糖的受體結(jié)合,阻礙寡糖與受體的相互作用。據(jù)此,在炎癥過程中,若使用寡糖模擬肽作為抑制劑,可以阻斷白細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附及遷移,起到抑制炎癥的作用。 本文目的是在由酵母聚糖A(Zymosan A)誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生的急性腹膜炎模型中篩選具有抗炎活性的寡糖模擬肽。 WP=5 炎癥模型的建立是利用酵母聚糖A(Zymosan A)能夠誘導(dǎo)產(chǎn)生炎癥的作用,以一定濃度的Zymosan A溶液注射到小鼠腹腔,引起小鼠的急性腹膜炎。然后使用該模型篩選6種表達(dá)寡糖LewisA和LewisX模擬肽的噬菌體,結(jié)果表明6種表達(dá)模擬肽的噬菌體對小鼠腹腔中性粒細(xì)胞滲出有不同程度的抑制,實驗組與對照組中性粒細(xì)胞計數(shù)的比較及中性粒細(xì)胞內(nèi)酶標(biāo)記物髓過氧化物酶(MPO)活性的測定都證實了該結(jié)果。其中4#(表達(dá)的肽結(jié)構(gòu)為IELLQAR)與G19噬菌體的抗炎活性較強。為進一步證實模擬肽的抗炎作用,再應(yīng)用這2種模擬肽的化學(xué)合成的肽,觀察其對小鼠急性腹膜炎的抑制情況。 上述結(jié)果表明,Zymosan A作為化學(xué)刺激因子,誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生急性腹膜炎癥,大量中性粒細(xì)胞滲出到腹腔。寡糖Lewis A或Lewis X的模擬肽,能在一定程度上抑制中性粒細(xì)胞的滲出,減輕炎癥反應(yīng)。這提示Zymosan A誘導(dǎo)血管內(nèi)皮細(xì)胞表達(dá)E-選擇素而引起中性粒細(xì)胞的滲出,而所篩選的寡糖Lewis A或Lewis X的模擬肽能夠作為競爭性抑制劑與E-選擇素結(jié)合,并阻斷E-選擇素與sLeX的作用,阻礙中性粒細(xì)胞與內(nèi)皮細(xì)胞的粘附及滲出,減輕炎癥反應(yīng)引起的損傷,這為進一步研制和開發(fā)抗炎試劑提供了實驗依據(jù)。
【圖文】：

A B圖 3 2#噬菌體對酵母聚糖誘導(dǎo)的小鼠腹膜炎的抑制（A：中性粒細(xì)胞計數(shù) B：MPO 活性）中性粒細(xì)胞與 MPO 活性分別減少 26%與 25%，，結(jié)果見表 3表 3 2#噬菌體組的細(xì)胞計數(shù)與 MPO 活性變化實驗組 對照組 抑制率 P例 數(shù) （n） 13 13中性粒細(xì)胞（×106） 4.93±1.59 6.66±1.94 26% p<0.05（ x ±SD）MPO (IU) 0.12±0.03 0.16±0.03 25% p<0.01（ x ±SD）(2) 4#噬菌體組的細(xì)胞計數(shù)與 MPO 活性變化。（圖 4）

圖 3 2#噬菌體對酵母聚糖誘導(dǎo)的小鼠腹膜炎的抑制（A：中性粒細(xì)胞計數(shù) B：MPO 活性）中性粒細(xì)胞與 MPO 活性分別減少 26%與 25%，結(jié)果見表 3表 3 2#噬菌體組的細(xì)胞計數(shù)與 MPO 活性變化實驗組 對照組 抑制率 P例 數(shù) （n） 13 13中性粒細(xì)胞（×106） 4.93±1.59 6.66±1.94 26% p<0.05（ x ±SD）MPO (IU) 0.12±0.03 0.16±0.03 25% p<0.01（ x ±SD）(2) 4#噬菌體組的細(xì)胞計數(shù)與 MPO 活性變化。（圖 4）
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R346

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本文編號：2648990