【摘要】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gandii)是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生性原蟲，可侵犯人體除紅細(xì)胞外所有有核細(xì)胞，是造成免疫缺陷患者致死性機(jī)會(huì)性感染及引起胎兒流產(chǎn)，死產(chǎn)和先天性弓形蟲病的重要病因。弓形蟲感染缺乏特異性的癥狀和體征，常規(guī)病原學(xué)檢測(cè)漏診率極高，探求靈敏且特異的檢測(cè)方法十分必要。核酸原位雜交(in situ hybridization)技術(shù)自60年代末發(fā)展起來(lái)，已廣泛應(yīng)用于染色體基因的定位，特定基因表達(dá)水平的觀察及微小病原體的檢測(cè)，能在成分復(fù)雜的組織中進(jìn)行單一細(xì)胞的研究而不受同一組織中其它成分的影響，特異性高，可精確定位，為弓形蟲的病理檢測(cè)提供了新的手段。本研究首次采用了寡核苷酸探針RNA原位雜交技術(shù)檢測(cè)到實(shí)驗(yàn)性小鼠感染組織內(nèi)的弓形蟲，并觀察了蟲體隨感染時(shí)間延長(zhǎng)在小鼠組織內(nèi)的增殖及動(dòng)態(tài)分布。 目的：采用寡核苷酸探針RNA原位雜交(RNA in situ hybridization)技術(shù)檢測(cè)并定位實(shí)驗(yàn)性感染小鼠組織內(nèi)的弓形蟲蟲體，同HE染色及間接免疫酶染色相比較，探討該技術(shù)在弓形蟲病理檢測(cè)中的應(yīng)用。觀察弓形蟲感染急性期的組織病變特點(diǎn)及經(jīng)腹腔感染的弓形蟲在各主要臟器的增殖和動(dòng)態(tài)分布。 材料和方法：設(shè)計(jì)并合成弓形蟲SAG2基因來(lái)源的寡核苷酸探針1條，同時(shí)采用文獻(xiàn)記載的18SrRNA位點(diǎn)來(lái)源的寡核苷酸探針，地高辛加尾標(biāo)記。以弓形蟲RH株速殖子10~3個(gè)經(jīng)腹腔感染昆明株小鼠，分別于感染后第2、3、4、5、6、7、8天處死，取肝、心、肺、腦組織制備石蠟標(biāo)本進(jìn)行HE染色，免疫組化染色及RNA原位雜交。 結(jié)果：RNA原位雜交法成功檢測(cè)到感染小鼠各組織內(nèi)的弓形蟲。蟲體于感染后第2天首先出現(xiàn)于肝臟中，第3天出現(xiàn)于心，肺組織，第6天腦內(nèi)發(fā)現(xiàn)蟲體。組織病變?yōu)榉翘禺愋匝仔圆∽�。肝、心肌組織內(nèi)可見(jiàn)形成明顯的假包囊，蟲灶呈點(diǎn)、片狀，分布不均。肺組織以游離蟲體為主，均勻分布。腦內(nèi)蟲體出現(xiàn)時(shí)間較晚且數(shù)量較少。共檢測(cè)感染小鼠28只，肝組織陽(yáng)性率為100％(28／28)，肺組織陽(yáng)性率為78.57％(22／28)，心肌陽(yáng)性率為71.43％(20／28)，腦組織陽(yáng)性率為21.43％(6／28)，檢出率高于HE染色(p＜0.01)，同免疫組化無(wú)顯著性差別(p＞0.05)。對(duì)照組小鼠7只，均未檢測(cè)到弓形蟲陽(yáng)性信號(hào)。 中文摘要 結(jié)論:寡核并酸探針RNA原位雜交法顯示組織內(nèi)蟲體清晰，，準(zhǔn)確，在形態(tài)學(xué) 研究及病原檢出率上明顯優(yōu)于HE染色，與免疫組化法無(wú)顯著差別。弓形蟲感染組 織病變?yōu)榉翘禺愋匝仔圆∽�。�?jīng)腹腔感染小鼠時(shí)，弓形蟲在各主要臟器的出現(xiàn)順序 為肝肺，心腦。
【圖文】：

感染后第6天心肌組織內(nèi)的假包囊(400x)

感染后第6天腦內(nèi)出現(xiàn)的游離蟲體(4oox)
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號(hào)】：R382

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2649347