本文關(guān)鍵詞：PFT-α聯(lián)合BMP-2誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞的研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:目前,缺血性心臟病在我國(guó)甚至全球的發(fā)病率越來越高,對(duì)人類健康的影響也越來越嚴(yán)重,針對(duì)此類疾病的傳統(tǒng)治療方法只能緩解病情,而不能從根本上修復(fù)梗死或丟失的細(xì)胞;由干細(xì)胞分化成心肌細(xì)胞來治療缺血性心臟病可以促進(jìn)細(xì)胞修復(fù)及血管再生,近年來通過細(xì)胞移植治療心血管疾病已受到國(guó)內(nèi)外專家學(xué)者的高度重視。骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)具有自我更新的能力,可以分化為多種細(xì)胞,包括心肌細(xì)胞,而且具備不涉及倫理爭(zhēng)議、易于取材及分離培養(yǎng)、低免疫原性等優(yōu)點(diǎn),成為了細(xì)胞移植治療缺血性心臟病的“種子細(xì)胞”,但由于BMSCs數(shù)量非常稀少,而且隨著年齡的增加此類細(xì)胞數(shù)量在逐漸減少,為了保證治療效果,大量擴(kuò)增純化及提高BMSCs的轉(zhuǎn)化率是十分必要的。目前在誘導(dǎo)劑的單獨(dú)使用方面已經(jīng)有大量實(shí)驗(yàn)成果,本實(shí)驗(yàn)將在此基礎(chǔ)上探究PFT-α(P53基因抑制劑)與BMP2(Bone Morphogenetic Protein 2,骨形態(tài)發(fā)生蛋白-2)分別及聯(lián)合誘導(dǎo)BMSCs向心肌細(xì)胞分化的效果,為細(xì)胞移植治療缺血性心臟病提供可借鑒性參考依據(jù)。方法:1 BMSCs誘導(dǎo)分化:取健康SD大鼠四肢長(zhǎng)骨,將骨髓中的BMSCs利用離心貼壁法分離出,并純化,培養(yǎng)于的IMDM培養(yǎng)液(含10%胎牛血清)中,每隔3d換液,選生長(zhǎng)良好的第2代BMSCs分別以含PFT-α20μmol/L、BMP-2 0.2ng/ml和加入聯(lián)合PFT-α20μmol/L及BMP-2 0.2ng/ml的IMDM培養(yǎng)液分組誘導(dǎo),同時(shí)以不加任何誘導(dǎo)劑的培養(yǎng)基的培養(yǎng)組作為對(duì)照組,誘導(dǎo)4天后將含有誘導(dǎo)液的培養(yǎng)基除去,加入新培養(yǎng)基(不含誘導(dǎo)液)中繼續(xù)培養(yǎng)4w。2免疫細(xì)胞化學(xué)染色:取各實(shí)驗(yàn)組以及空白對(duì)照組誘導(dǎo)4周的細(xì)胞,在化學(xué)染色光鏡下觀察細(xì)胞中α-actin(α-橫紋肌肌動(dòng)蛋白)、desmin(結(jié)蛋白)、c Tn T(心肌特異性肌鈣蛋白)和c Tn I(肌鈣蛋白-I)陽(yáng)性細(xì)胞的表達(dá)情況。3免疫熒光雙標(biāo)染色技術(shù):取PFT-α聯(lián)合BMP-2誘導(dǎo)組培養(yǎng)4周的細(xì)胞進(jìn)行爬片,運(yùn)用免疫熒光染色法對(duì)細(xì)胞α-actin、c Tn T蛋白進(jìn)行熒光標(biāo)記,觀察α-actin、c Tn T的共表達(dá)情況。4透射電鏡觀察:將PFT-α聯(lián)合BMP-2誘導(dǎo)4周的細(xì)胞通過離心、脫水等處理制成切片,用透射電鏡觀察其內(nèi)部結(jié)構(gòu)。結(jié)果:1 BMSCs培養(yǎng):通過運(yùn)用離心法與貼壁分離篩選法分離培養(yǎng)的BMSCs細(xì)胞接種24 h后貼壁逐漸增多,類圓形;3d后貼壁長(zhǎng)梭形細(xì)胞數(shù)量明顯增加;6d后貼壁細(xì)胞已有分裂增殖。2免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè):desmin、α-actin、c Tn T和c Tn I陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞在各誘導(dǎo)組中均可見,通過觀察,PFT-α與BMP-2聯(lián)合誘導(dǎo)組陽(yáng)性表達(dá)細(xì)胞明顯高于其他組(P0.01或P0.05)。3免疫熒光雙標(biāo)染色:通過觀察,PFT-α與BMP-2聯(lián)合誘導(dǎo)組分化細(xì)胞胞漿內(nèi)有α-actin表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞,呈紅色,c Tn T表達(dá)陽(yáng)性細(xì)胞呈綠色,當(dāng)二者重疊后觀察顏色為黃色,說明聯(lián)合誘導(dǎo)組有α-actin和c Tn T同時(shí)表達(dá)的情況。4透射電鏡觀察:分化細(xì)胞呈條帶狀,部分細(xì)胞表面出現(xiàn)突起;胞核位置居中;胞漿含有高爾基復(fù)合體、糖原顆粒、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)等,細(xì)胞器豐富;胞漿內(nèi)還可見細(xì)肌絲樣結(jié)構(gòu)平行排列,隱約見明暗相間的橫紋。結(jié)論:1 BMSCs可以通過BMP-2單獨(dú)誘導(dǎo)、PFT-α單獨(dú)誘導(dǎo)以及PFT-α聯(lián)合BMP-2共同誘導(dǎo)等方式成功分化為心肌細(xì)胞。2通過對(duì)各實(shí)驗(yàn)組及對(duì)照組分化細(xì)胞的desmin、α-actin、c Tn T和c Tn I的表達(dá)情況以及形態(tài)學(xué)觀察對(duì)比,觀察到PFT-α聯(lián)合BMP-2共同誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌細(xì)胞分化的陽(yáng)性率明顯高于PFT-α和BMP-2分別單獨(dú)誘導(dǎo)分化的陽(yáng)性率,PFT-α與BMP-2聯(lián)合誘導(dǎo)的方式更加高效。
【關(guān)鍵詞】：PFT-α BMP-2 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 誘導(dǎo)分化 心肌樣細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-11
• 材料與方法11-18
• 結(jié)果18-20
• 附圖20-27
• 附表27-29
• 討論29-31
• 結(jié)論31-32
• 參考文獻(xiàn)32-35
• 綜述 骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞研究進(jìn)展35-50
• 參考文獻(xiàn)45-50
• 致謝50-51
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷51

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 曹欣欣;戴玉華;張抒揚(yáng);陳連鳳;楊琳;方全;嚴(yán)曉偉;;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2007年02期

  本文關(guān)鍵詞：PFT-α聯(lián)合BMP-2誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為心肌樣細(xì)胞的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：264875