【摘要】： 目的：研究兩種冷凍保護劑乙烯已二醇(Ethylene Glycol,EG)和甘油(Clycero,GC)在不同濃度和暴露時間的條件下對桑葚胚及囊胚的毒性影響；比較桑葚胚、早期囊胚和囊胚經(jīng)玻璃化法(Vitrification)、EG慢速冷凍和GC慢速冷凍三種方法凍融后胚胎繼續(xù)發(fā)育的潛能；初步確定玻璃化法冷凍種植前晚發(fā)育時期胚胎的最佳階段。 方法：1．桑葚胚、早期囊胚和囊胚分別暴露于1.5M EG磷酸鹽緩沖液、1.5M GC磷酸鹽緩沖液20min，6.0M EG磷酸鹽緩沖液5min，以暴露于不含冷凍保護劑的磷酸鹽緩沖液為對照，觀察在胚胎體外培養(yǎng)系統(tǒng)M16培養(yǎng)液繼續(xù)發(fā)育的情況。2．桑葚胚、早期囊胚和囊胚三個發(fā)育階段的胚胎均用玻璃化法、EG慢速冷凍和GC慢速冷凍法凍存，比較三種方法凍融后胚胎繼續(xù)發(fā)育的情況。3．比較三個階段胚胎經(jīng)玻璃化法凍存后凍融胚胎繼續(xù)發(fā)育的情況。 結(jié)果：1在1.5M EG磷酸鹽緩沖液、1.5M GC磷酸鹽緩沖液中暴露20min，6.0M EG磷酸鹽緩沖液暴露5min后，在體外培養(yǎng)中桑葚胚、早期囊胚和囊胚繼續(xù)發(fā)育與對照組相比沒有顯著性差異，對胚胎沒有明顯毒性影響。2桑葚胚經(jīng)玻璃化法、EG慢速冷凍法和GC慢速冷凍法三種方法凍存后，凍融胚胎囊胚形成率分別為：85.7％、71.1％、48.7％，囊胚孵出率分別為：59.5％、42.2％、23.1％，玻璃化法和EG慢速冷凍法高于GC慢速冷凍法(P＜0.01，，P＜O.05)，玻璃化法與EG慢速冷凍法相比沒有顯著性差異(P＞0.05)。三種方法凍存早 天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 期襄胚融解后擴張襄胚形成率分別為65.錢、26.既、41%，班胚孵出率51.錢、 l外、28.既，凍存班胚融解后囊胚重新擴張率為43.既、21 .1%、22.5%，. 胚孵出率為29.2%、10.5%、1既。在早期襄胚和澳胚的凍存中，玻璃化法凍 融后胚胎繼續(xù)發(fā)育率高于EG慢速冷凍法和GC慢速冷凍法(P0 .01，P0 .05) EG慢速冷凍法與Gc慢速冷凍法相比沒有顯著性差異(P0 .05)。 結(jié)論:1.SMEG、1.SMGC溶液及6.0施G在本研究采用的冷凍條件下對胚 胎沒有毒性影響。對干桑甚胚，玻璃化法和EG慢速冷凍法優(yōu)于GC慢速冷凍 法;早期囊胚和囊胚玻璃化法冷凍效果優(yōu)于EG和Gc慢速冷凍法。在慢速冷 凍中，EG較GC更適于桑套胚。桑甚胚可能是玻璃化法凍存種植前晚發(fā)育時 期胚胎的最佳階段。
【圖文】：

三種方法凍存桑甚胚后凍融胚胎生長情況

三種方法凍存早期囊胚后凍融胚胎生長情況
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R321

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本文編號：2641966