【摘要】： 急性心肌缺血是引起心臟性獰死的常見原因之一，在法醫(yī)學(xué)的實(shí)踐中經(jīng)常遇到。在實(shí)際工作中，由于我們接觸到的急性心肌缺血往往是在數(shù)小時(shí)甚至幾分鐘內(nèi)造成死亡，在肉眼檢查及普通光鏡觀察通常不能發(fā)現(xiàn)心肌特征性的形態(tài)學(xué)改變。因此，對此類案件在形態(tài)學(xué)上如何診斷早期心肌缺血性病變一直是法醫(yī)病理學(xué)研究的重要課題。心肌肌鈣蛋白T(Cardiac troponin T，cTnT)是心肌收縮調(diào)節(jié)蛋白肌鈣蛋白(Troponin，，Tn)的亞單位之一，位于細(xì)絲上。目前多數(shù)研究證明，在出現(xiàn)心肌缺血梗死后，患者血液中cTnT濃度明顯增高，且其濃度的變化，可反應(yīng)心肌缺血性梗死的面積及其預(yù)后情況。對早期心肌缺血中應(yīng)用cTnT進(jìn)行免疫組織化學(xué)研究尚未見報(bào)道。結(jié)蛋白(Desmin)是心肌的中間絲蛋白，是細(xì)胞骨架蛋白的組成部分，這在早期心肌細(xì)胞缺血受損時(shí)，往往會脫失，國內(nèi)外已有報(bào)道，但結(jié)果不一。而連接蛋白43(Connexin 43，CX43)是心臟的細(xì)胞縫隙連接蛋白，主要分布在心肌閏盤上，與心肌細(xì)胞間信息傳導(dǎo)相關(guān)。目前國外利用免疫熒光法、激光共聚焦免疫熒光法觀察研究證明，在心肌缺血性心臟疾病中有異常表現(xiàn)，尚未見利用免疫組化對早期心肌缺血性病變研究的 浙江人 學(xué) 碩 十學(xué) 位論文 相關(guān)報(bào)道。 本研究旨在通過免疫組化方法，檢測cTnT、Desmin及CX43在大鼠 急性心肌缺血實(shí)驗(yàn)?zāi)Ｐ偷谋磉_(dá)，探討它們在eVj心肌缺血．時(shí)的分布惜況， ’為早期心肌缺血的法醫(yī)病理學(xué)診斷捉供一項(xiàng)重要指標(biāo)及理論依據(jù)。 材料與方法 1、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及急性心肌缺血模型的建立 實(shí)驗(yàn)選用SD人鼠（浙江省醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供）60只，雌雄不限，4“月齡，體 重300土359，隨機(jī)分為止常對照組、缺血持續(xù)15Inin織、缺血持續(xù)30un組、 缺血持續(xù) lh組、缺血持續(xù)刀組、缺血持續(xù)訃組。每織 10只。上常對照組采馭 麻醉后開胸，直接剪取心臟。缺血各組根據(jù)文獻(xiàn)方法給扎左冠狀動(dòng)脈，在不同時(shí) 間剪取心臟。 2、固定、取材及切片 將剪取的心臟立刻放入 10％福爾馬林溶液中飼定，2411后取山，（卜山虹中段 橫取Zln＊）旱的組織塊，？K規(guī)脫水、透明、浸蛤、包圳，Leitz］52切片機(jī)遷續(xù) 切片，）ggr為sum。 3、HE染色及免疫組化染色 常規(guī)方法對每糾心臟切片洲IHE染色。采用 DAKA公司捉供 Ev卜巾n二步 法免疫織化試劑盒，一抗分別為鼠抗cTnT抗體（l：100稀釋）、兔抗CX43抗體（l：50 稀稈）、鼠抗Deslnin抗體（l：100稀稈），操作按試劑盒說明＊進(jìn)行，DAB顯色， 復(fù)染封片，Olympus光學(xué)顯微鏡觀察。 4、圖像分析 對各組掄疫組化切片，在O…。pUS－BHZ光學(xué)顯微鏡下觀察，在左心壁及室間 隔缺血部位隨機(jī)選取 5個(gè)視野，經(jīng)攝像頭傳入電腦后，利用 HPIAS．1000（高清晰 度病理圖像分析儀，High resolution Pathological Image Analysis System，華中科技 二 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院）進(jìn)行圖像分析。對。TnT及Desmin的各組免疫組化染色切片， 主要測量其染色缺失面積及缺失區(qū)平均灰度。 5、統(tǒng)計(jì)分析 ’數(shù)據(jù)以平均數(shù)士標(biāo)準(zhǔn)差表示，用 SpSS統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析 （one－wny ANOVA）。 結(jié)果 1、常規(guī)HE染色： 正常對照組及急性心肌缺血各組細(xì)胞染色清晰，橫紋清楚，細(xì)胞核致密，細(xì) 胞結(jié)構(gòu)完整，未見明顯的細(xì)胞壞死及炎癥細(xì)胞浸澗。正常組與各組早期心肌缺血 之間無明顯差異。 2、C＊＊T免疫組化染色 正常組低倍鏡下見心肌纖維染成棕黃色，術(shù)見明顯缺染；高倍鏡下見陽性著 色呈橫紋樣表現(xiàn)，染色清晰。在心肌缺血持續(xù) 15min～訃的各組，均可見到不同 程度的心肌細(xì)胞內(nèi) CTCT缺火，與正常組相比，有顯著性差異（P＜0刀1）：兩兩比 較中缺火面積在缺血刀內(nèi)隨著時(shí)間的延長而增大（P＜0刀 1）。缺血各組缺染區(qū)域灰 度與正常組比較，均有顯著性差異（P＜0．of）。30min組與 15min組之間有顯著性 差異（P＜0刀1）；而30mh以后各組表現(xiàn)為較完全的缺大，相互之間比較無明
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：R363

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本文編號：2641690