發(fā)布時(shí)間：2020-04-24 23:07

【摘要】： 視神經(jīng)是中樞神經(jīng)的一部分，它是由視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞（RGC）的 胞體發(fā)出的軸突和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞組成，成分單一，便于研究，它是研究 中樞神經(jīng)損傷和神經(jīng)移植的最佳材料。視神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞主要包括星形膠 質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，發(fā)育中的星形膠質(zhì)細(xì)胞（胚胎期8天至產(chǎn)后4 天，E8～P4期）能促進(jìn)損傷后視神經(jīng)的再生。然而臨床上視神經(jīng)損傷 的最常見的好發(fā)部位為管內(nèi)段的視神經(jīng)，因此管內(nèi)段的視神經(jīng)星形膠質(zhì) 細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能研究成為中樞神經(jīng)損傷和移植研究的 熱點(diǎn)之一，體外培養(yǎng)、分離、純化P_2期小鼠管內(nèi)段視神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞、 少突膠質(zhì)細(xì)胞又是這些研究的基礎(chǔ)。本課題成功地體外培養(yǎng)、分離、純 化P_2期小鼠管內(nèi)段視神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞，觀察了生物學(xué) 特性，為進(jìn)一步研究視神經(jīng)的損傷和移植提供可靠材料。 目的：管內(nèi)段視神經(jīng)是視神經(jīng)損傷的常見部位，不同部位的視神經(jīng)其膠 質(zhì)細(xì)胞的組成和承擔(dān)的作用亦不同，正確獲取P_2期小鼠管內(nèi)段視神經(jīng)， 體外培養(yǎng)、分離、純化P_2期小鼠視神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞， 觀察純化的星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞的生物學(xué)特性，為進(jìn)一步研究 視神經(jīng)的損傷和移植提供可靠材料。 方法：在手術(shù)顯微鏡下分別經(jīng)顱開眶和經(jīng)眼眶外側(cè)開眶兩種手術(shù)方法獲 取P_2期小鼠管內(nèi)段視神經(jīng)2mm，組織塊直接培養(yǎng)P_2期小鼠視神經(jīng)膠質(zhì)細(xì) 胞，利用搖床振蕩法分離純化星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，特異性蛋 白（膠質(zhì)原纖維酸性蛋白-G F A P，髓鞘堿性蛋白-MBP）標(biāo)記，免疫組 視神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的培養(yǎng)及其特征觀察 中文摘要 化方法染色，間接免疫熒光標(biāo)記，流式細(xì)胞儀檢測(cè)其相關(guān)特性。 結(jié)果：經(jīng)眼眶外側(cè)開眶法獲取P。期小鼠管內(nèi)段視神經(jīng)手術(shù)復(fù)雜，眶入口、 視神經(jīng)管的隆突等解剖標(biāo)志不易辯認(rèn)，但出血少；經(jīng)顱開眶法對(duì)小鼠來 說相對(duì)較容易，，視交叉解剖標(biāo)志易找，費(fèi)時(shí)短，但出血多。視神經(jīng)星形 膠質(zhì)細(xì)胞體外培養(yǎng)能迅速分裂增殖，少突膠質(zhì)細(xì)胞生長(zhǎng)發(fā)育緩慢，傳代 困難，振蕩法能夠分離純化細(xì)胞，所獲細(xì)胞純度高，星形膠質(zhì)細(xì)胞GF A P染色，陽性率 9 8％，少突膠質(zhì)細(xì)胞 MBP染色陽性，陽性率 9 6％。 結(jié)論：經(jīng)顱開眶是快速獲取P。期小鼠管內(nèi)段視神經(jīng)的較好方法，組織塊 直接培養(yǎng)P。期小鼠視神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞，利用搖床振蕩法分離純化星形膠質(zhì) 細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，經(jīng)免疫組化鑒定，所獲細(xì)胞純度高，是進(jìn)一步研 究視神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞的結(jié)構(gòu)和功能以及神經(jīng)損傷后修復(fù)的可靠材料。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 屈衛(wèi)東,彭曉東,吳德生,肖幫良,翁貴武,劉發(fā)才;星形膠質(zhì)細(xì)胞、少突膠質(zhì)細(xì)胞分離培養(yǎng)新方法研究[J];衛(wèi)生研究;1999年05期

2 謝學(xué)軍;視神經(jīng)的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞[J];眼科研究;1997年02期

3 彭廣華,李志杰,李辰;視網(wǎng)膜Müller細(xì)胞原代培養(yǎng)的技術(shù)研究[J];眼科研究;1998年01期

本文編號(hào)：2639480