【摘要】： JWA基因是周建偉等1998年發(fā)現(xiàn)和克隆的受維甲酸誘導(dǎo)的新基 因，登錄在NCBI基因庫中的編號為AF070523。到目前為止，除我們 實驗室外尚未發(fā)現(xiàn)有其他學(xué)者對JWA基因進行系統(tǒng)研究的報道。 JWA基因cDNA包含2114個核苷酸，編碼188個氨基酸，初步分析 結(jié)果表明JWA在細胞體內(nèi)的功能較為活躍。本研究的目的在于通過 對JWA基因結(jié)構(gòu)的分析，尋找研究JWA基因功能的切入點；同時建 立檢測JWA表達產(chǎn)物的方法，為研究JWA基因提供有力工具。 應(yīng)用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)分析人基因組DNA，檢測JWA基因中是否 存在內(nèi)含子。根據(jù)JWAcDNA序列，設(shè)計了多對能夠擴增JWA基因 不同片斷的引物；分別以人基因組DNA和JWA cDNA為模板，交叉 擴增JWA基因的不同片段序列。結(jié)果從兩個模板擴增出的產(chǎn)物大小 一致，初步表明JWA基因中不含有內(nèi)含子。 用分子克隆技術(shù)分別構(gòu)建了含JWA啟動子和大鼠JWA同源基因 的重組體，經(jīng)過測序獲得JWA啟動子621bp序列和大鼠JWA編碼區(qū) 序列。在啟動子序列中含有佛波酯反應(yīng)元件（TRE），應(yīng)激反應(yīng)元件、 Hemin、NFκB、熱休克反應(yīng)元件及ATRA反應(yīng)元件的半位點（SRE）， 提示JWA基因表達可能受多種因素調(diào)節(jié)。進一步用TPA、全反式維 甲酸、4HPR等誘導(dǎo)分化劑處理K562、NB4、NIH3T3三種細胞株和 M3型白血病人原代培養(yǎng)的白細胞，觀察JWA在轉(zhuǎn)錄水平上的變化， 結(jié)果發(fā)現(xiàn)：JWA表達對誘導(dǎo)分化劑的作用表現(xiàn)出相當(dāng)活躍的變化； TPA和4HPR兩種藥物對JWA的表達調(diào)節(jié)方向與細胞株的性質(zhì)有 關(guān)；而M3型白血病細胞被ATRA誘導(dǎo)可能是其它誘導(dǎo)分化劑調(diào)節(jié) 南京醫(yī)科大學(xué)碩士中fi淪文 J帥表達的前提。盡管這些結(jié)果還不足以闡明 j帥基因的功能特 點，懶示IWA基囚結(jié)構(gòu)與功能之間存在看必然的聯(lián)系，并為研究 它的功s測一了方后和刻＊。 將大鼠J帥編碼區(qū)序列與人J帥基因比較，發(fā)現(xiàn)4個核替站 相應(yīng)4個氨基酸不同，推漢 JWA基因在大鼠和人的細胞中生物學(xué)功 另可能相近。J帥在這兩個跨度較大的種屬中呆持 了相 寸穩(wěn)定的 DN A序列，提示該基因在生物刪匕過程中可h測呆守。 為確定J帆表達嚴(yán)物在細胞內(nèi)的冰；構(gòu)建了J WAWA，以i廠熒光 重紐體，利用基因轉(zhuǎn)染4支術(shù)，將重組體整合入培養(yǎng)細胞的基因紐 ＊＊A中；使其在培養(yǎng)鄉(xiāng)胞中穩(wěn)定表達。In廠P熒允融合蛋白，在 激光共聚焦顯敝下間舢蔡J帥在細胞生活狀態(tài)下的分抑青況。 結(jié)果提示門WA蛋白分布在細胞漿內(nèi)，在核膜邊賊較多的聚集， 對圭H膿形成刨莫狀，這些者卜 全月包胃架特別刪管蛋白在5［0）泡內(nèi)丙 分布相｛，。 運用機免疫吸附側(cè)4支術(shù)，對制備的兩株兔抗JWA多克降抗 體進行了鑒定，，這兩郴元體均有附的劑量朋關(guān)系，在1：1（北們 勺能與抗原頗并達到＃鈔于的和b腹。采用W匕匕111 net方法，S紅卯不 同來源細胞中 JWA表達產(chǎn)物，結(jié)果在人源性、鼠源性細胞蛋白叫V 有特異性蛋白條帶出現(xiàn)，其大小與預(yù)測的JWA蛋白肝量一致，丁 以確定這個條帶就是J叭表達產(chǎn)物Z 用抗J帥抗體對多種腫瘤組織 進jyffo疫繃b 紅保討了JWA蛋白表達與腫瘤的關(guān)系。 揪寸以上實驗結(jié)果，｛峨什J從多方面初步了解了J帥基因的基木 結(jié)構(gòu)和功能。近期課題組又在研冗J帥基因參與細胞分化和凋亡小Z 節(jié)、輛細H腋激反應(yīng)調(diào)節(jié)等方面取得了有意義的研究成果，為進一 步全面闡明J帥基固的生物學(xué)功S刪了有價值的邯卜
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號】：R346

【參考文獻】

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本文編號：2639460