【摘要】：目的 探討用改良SYBR green Ⅰ實(shí)時定量PCR(RQ-PCR)技術(shù)，消除引物二聚體(PDs)對定量分析的影響，建立準(zhǔn)確的定量檢測DNA含量的方法。 方法 以β-actin為目的基因，通過對擴(kuò)增產(chǎn)物和PDs熔解曲線的分析找出各自的解鏈溫度(Tm)，選擇在高于PDs Tm但低于目的片段Tm的溫度時檢測熒光信號，，建立改良SYBR green Ⅰ RQ-PCR方法。用此法構(gòu)建了標(biāo)準(zhǔn)曲線，并檢測了該法用于DNA定量的精確性和穩(wěn)定性。 結(jié)果 該法可消除PDs對SYBR green Ⅰ實(shí)時定量PCR的影響。所得標(biāo)準(zhǔn)曲線斜率為-3.178866，相關(guān)系數(shù)為-0.980535，PCR反應(yīng)動力學(xué)范圍達(dá)5個log值(10~-10~6)；精確性檢測中，DNA含量實(shí)測值與預(yù)測值的差異無顯著性(P＞0.05)；穩(wěn)定性檢測中，三種不同濃度標(biāo)本的批內(nèi)變異和批間變異分別為1％、3％、2％和2％、4％、4％。 結(jié)論 改良SYBR green Ⅰ實(shí)時定量PCR可有效消除PDs對定量分析的影響，對目的基因DNA拷貝數(shù)進(jìn)行PCR反應(yīng)線性范圍廣、敏感性高、精確性佳、穩(wěn)定性好的定量檢測。是一種簡便實(shí)用的DNA定量檢測的方法。
【學(xué)位授予單位】：昆明醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R346

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2638961