【摘要】： 目的 脂質(zhì)是生物體內(nèi)的一類重要物質(zhì)，不僅參與能量的利用和儲存，也是細(xì)胞膜的主要結(jié)構(gòu)成分，同時還在體溫的維持、神經(jīng)沖動的傳導(dǎo)等方面發(fā)揮重要的作用。體內(nèi)的脂質(zhì)和其他分子一樣，處于活躍的代謝過程中，尤其在生命過程的特殊階段—胚胎的發(fā)育過程中，脂質(zhì)對胎兒的正常發(fā)育更加重要。為了維持旺盛的生長速率，胎兒需要比成人更多的脂質(zhì)。然而，對于胚胎期胎兒脂質(zhì)代謝的情況所知甚少，一般用母體血液或臍血中的一些生化指標(biāo)作為評價標(biāo)準(zhǔn)，，這些指標(biāo)不僅間接而且單一，不能全面、直接的反映胎兒脂代謝方面的情況。本研究以人胚肝臟為研究材科，用cDNA Microarray芯片結(jié)合實時熒光半定量PCR的方法，研究人類胚胎發(fā)育過程中肝臟脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)譜，并對芯片中沒有涉及到的重要的脂代謝相關(guān)基因進(jìn)行檢測，以此探討人類胚胎發(fā)育過程中的脂代謝變化特點。方法 收集正常胎兒及成人肝臟標(biāo)本，冷抽提法測量胎肝中的脂質(zhì)成分。一步法抽提孕早期、孕晚期胎兒及成年期肝臟組織總RNA，取等量mRNA逆轉(zhuǎn)錄標(biāo)記~(33)P，制成cDNA探針后與人類全基因cDNA Microarray芯片雜交，用相應(yīng)軟件分析雜交信號掃描結(jié)果。再用生物信息學(xué)的方法對雜交數(shù)據(jù)進(jìn)行聚類分析，找出脂代謝相關(guān)基因的表達(dá)譜，并對其中有差異表達(dá)的基因用實時熒光半定量PCR方法進(jìn)行驗證。用實時熒光定量PCR檢測胚胎發(fā)育期LDLR家族成員差異表達(dá)情況。結(jié)果 按照陽性標(biāo)準(zhǔn)，綜合三張芯片的結(jié)果，在進(jìn)入研究的7661條陽性基因共呈現(xiàn)出不同類型的9種表達(dá)趨勢；對其中孕早期、孕晚期兩張芯片進(jìn)行進(jìn)一步分析發(fā)現(xiàn)，確定與脂代謝相關(guān)的基因 南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 共有135條，其中有差異表達(dá)門倍以上）的基因有28條，隨著胎 齡增長，脂肪酸分解的相關(guān)基因呈現(xiàn)上調(diào)趨勢，脂肪酸和膽固醇合成 的相關(guān)基因呈現(xiàn)下調(diào)趨勢。檢測9例胚肝組織的脂質(zhì)含量，發(fā)現(xiàn)膽固 醇和甘油三酯水平隨胎齡增長而逐漸下降。熒光定量PCR的方法檢 刪 LDL受體家族基因（LDLR、LRP）表達(dá)發(fā)現(xiàn)，這些基因呈現(xiàn)上調(diào) 趨勢。結(jié)論 人類胚胎的發(fā)育是一個復(fù)雜的過程，許多基因參與其 中，脂質(zhì)代謝在胚胎發(fā)育過程中發(fā)揮重要作用；胚胎肝臟的膽固醇和 甘油三酯的合成率及含量可能隨著脂代謝受體的發(fā)育成熟而呈現(xiàn)下降 趨勢。基因芯片結(jié)合熒光定量 PCR的方法成熟、方便，可以大規(guī)模 平行展現(xiàn)基因差異表達(dá)情況，有廣泛的應(yīng)用前景。
【圖文】：

胎兒肝臟標(biāo)本病理結(jié)果圖

1、總RNA甲醛變性膠結(jié)果電泳條帶清晰，285與185比值約為2:1，且無明顯降解，表明所獲總RNA質(zhì)量符合要求(見圖4)。285185圖4:總RNA甲醛變性膠電泳圖2、總RNA光密度瀏定結(jié)果總RNAI:100稀釋后的光密度檢測結(jié)果顯示:三例樣品吸光度OD26。/OnZs。均>1.8，表明總RNA質(zhì)量良好(見表3)。表3:總RNA光密度測定結(jié)果孕早期孕晚期OD26oOD28oOD32oOD23oOD26o/ODZsoRNA(ug/ml)Protein(mg/ml)成年期0.6710.3530.0080.4151.90326.90.052巧638744
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R321

【參考文獻(xiàn)】

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1 桑國衛(wèi)，翁黎駒，邵慶翔，杜明昆，吳學(xué)浙，盧玉蘭，程利南;不同劑量米非司酮和米索前列醇終止早孕的臨床研究[J];中華婦產(chǎn)科雜志;1994年12期

本文編號：2625839