【摘要】：由白細(xì)胞介素2(IL-2)及其受體(IL-2R)為核心的自分泌體系在T淋巴細(xì)胞的正常生長(zhǎng)、增殖和免疫功能的發(fā)揮中起著關(guān)鍵作用。高親和力的白細(xì)胞介素2受體至少由α、β、γ三種亞基組成，其中只有α亞基呈誘導(dǎo)表達(dá)，而且是淋巴細(xì)胞中結(jié)合IL-2的唯一特異成分，因此，IL-2α亞基在機(jī)體對(duì)IL-2作用的免疫效應(yīng)中起著重要作用，與其相一致，IL-2Rα亞基的表達(dá)受到嚴(yán)格的調(diào)控。 基因定向整合技術(shù)是新近發(fā)展起來(lái)可用于細(xì)胞基因組定向修飾的新方法。為了研究IL-2Rα基因在T淋巴細(xì)胞的功能，并建立體細(xì)胞基因敲除的模式系統(tǒng)，我們對(duì)在Jurkat細(xì)胞中敲除IL-2Rα基因進(jìn)行了探索，并對(duì)IL-2Rα基因第一內(nèi)含子的轉(zhuǎn)錄調(diào)控活性進(jìn)行了初步研究。 一、懸浮細(xì)胞甲基纖維素半固體克隆化培養(yǎng)方法的建立與Jurkat Tet-on細(xì)胞系的建立。我們借鑒在雜交瘤細(xì)胞中用于克隆化培養(yǎng)的甲基纖維素半固體培養(yǎng)方法，用于懸浮細(xì)胞Jurkat細(xì)胞的克隆化培養(yǎng)，成功地建立了Jurkat Tet-on細(xì)胞系-rtTA③。通過(guò)Southern雜交顯示，在rtTA③細(xì)胞中有rtTA基因的整合，Luciferase報(bào)告基因的轉(zhuǎn)染結(jié)果表明，rtTA③細(xì)胞系在Dox 1μg／ml濃度下誘導(dǎo)近30倍的Luciferase的表達(dá)。 二，IL-2Rα基因第三內(nèi)含子的克隆與核苷酸序列測(cè)定。應(yīng)用PCR方法，擴(kuò)增了IL-2Rα基因第三內(nèi)含子2.5Kb片段，并成功克隆到pBS-SK載體中。構(gòu)建了一系列亞克隆并測(cè)定了2.5Kb全核苷酸序列，其中2228bp堿基序列為國(guó)內(nèi)外首次測(cè)定，此核苷酸序列已被Genbank接受，接受號(hào)為U56389。通過(guò)計(jì)算機(jī)分析發(fā)現(xiàn)IL-2Rα基因第三內(nèi)含子具有典型的G↓GU……Py rich(～15bp)NCAG↓GU結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：1998
【分類號(hào)】：R392

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