【摘要】：由白細胞介素2(IL-2)及其受體(IL-2R)為核心的自分泌體系在T淋巴細胞的正常生長、增殖和免疫功能的發(fā)揮中起著關鍵作用。高親和力的白細胞介素2受體至少由α、β、γ三種亞基組成，其中只有α亞基呈誘導表達，而且是淋巴細胞中結合IL-2的唯一特異成分，因此，IL-2α亞基在機體對IL-2作用的免疫效應中起著重要作用，與其相一致，IL-2Rα亞基的表達受到嚴格的調控。 基因定向整合技術是新近發(fā)展起來可用于細胞基因組定向修飾的新方法。為了研究IL-2Rα基因在T淋巴細胞的功能，并建立體細胞基因敲除的模式系統(tǒng)，我們對在Jurkat細胞中敲除IL-2Rα基因進行了探索，并對IL-2Rα基因第一內含子的轉錄調控活性進行了初步研究。 一、懸浮細胞甲基纖維素半固體克隆化培養(yǎng)方法的建立與Jurkat Tet-on細胞系的建立。我們借鑒在雜交瘤細胞中用于克隆化培養(yǎng)的甲基纖維素半固體培養(yǎng)方法，用于懸浮細胞Jurkat細胞的克隆化培養(yǎng)，成功地建立了Jurkat Tet-on細胞系-rtTA③。通過Southern雜交顯示，在rtTA③細胞中有rtTA基因的整合，Luciferase報告基因的轉染結果表明，rtTA③細胞系在Dox 1μg／ml濃度下誘導近30倍的Luciferase的表達。 二，IL-2Rα基因第三內含子的克隆與核苷酸序列測定。應用PCR方法，擴增了IL-2Rα基因第三內含子2.5Kb片段，并成功克隆到pBS-SK載體中。構建了一系列亞克隆并測定了2.5Kb全核苷酸序列，其中2228bp堿基序列為國內外首次測定，此核苷酸序列已被Genbank接受，接受號為U56389。通過計算機分析發(fā)現(xiàn)IL-2Rα基因第三內含子具有典型的G↓GU……Py rich(～15bp)NCAG↓GU結構特點，
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：1998
【分類號】：R392

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本文編號：2625825