【摘要】：目的 探索IGF-1、TGFβ1、GH和培養(yǎng)基對(duì)體外培養(yǎng)的兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖和分化的影響。 方法 實(shí)驗(yàn)分兩部分進(jìn)行，第一部分首先將三月齡兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞分別接種于含15％小牛血清的1640和F-12培養(yǎng)基中，然后鏡下觀察其貼壁時(shí)間和第1，2，3，4，5，6，，7，14和21天細(xì)胞計(jì)數(shù)，阿新藍(lán)比色法定量檢測(cè)兩組細(xì)胞GAG的分泌，MASSON染色結(jié)合圖像分析法半定量檢測(cè)兩組細(xì)胞膠原合成。 第二部分首先以不同濃度的IGF-1、TGF-β_1、GH和IGF-1+GH分別刺激第三代軟骨細(xì)胞，一周后以MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖率，同前方法檢測(cè)GAG和膠原分泌量。然后，通過形態(tài)學(xué)的變化和組化染色觀察軟骨細(xì)胞在細(xì)胞因子作用下是否發(fā)生去分化，已發(fā)生去分化的細(xì)胞在細(xì)胞因子的作用下能否再分化。 最后，以配對(duì)t檢驗(yàn)比較兩種培養(yǎng)基對(duì)軟骨細(xì)胞增殖和基質(zhì)合成的影響；以單因素方差分析和x~2檢驗(yàn)比較IGF-1、TGF-β_1、GH、IGF-1+GH對(duì)軟骨細(xì)胞增殖和基質(zhì)合成的影響。 結(jié)果 1 原代細(xì)胞在1640培養(yǎng)基中貼壁更早、生長(zhǎng)較快；傳代后兩種培養(yǎng)基中軟骨細(xì)胞增殖速度無區(qū)別，但1640組分泌基質(zhì)功能更活躍。 南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文 2細(xì)胞因子和生長(zhǎng)激素刺激兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖的最佳濃 度為:T6F 4ong/ml，IGF 1 OOng/ml，GH SOong/ml，IGF loong/ml+ GH soong/ml。JGF十GH組細(xì)胞增殖速度和基質(zhì)分泌量提高最明 顯，其次是IGf一1組，再次是丁GF一團(tuán)組，GH組影響最小。 3 TGF、IGF一1能維持軟骨細(xì)胞表型，減緩其去分化，TGF一印 還有刺激軟骨細(xì)胞再分化作用。 結(jié)論 用1640培養(yǎng)基培養(yǎng)兔關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞更合理，它更有利于原 代關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的存活和增殖。而使用適當(dāng)濃度的細(xì)胞因子可明 顯提高關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞的增殖和合成分泌功能并維持其表型。GH 也能促進(jìn)體外培養(yǎng)的關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞增殖，且IGF和GH聯(lián)用有協(xié) 同作用，能進(jìn)一步提高細(xì)胞基質(zhì)的合成。
【圖文】：

南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文n型膠原的檢測(cè)三代兩組細(xì)胞Masson染色膠原均為陽性。組細(xì)胞接種片膠原染色的圖像分析結(jié)果為:1640組平均面.35士10.00)emZ，F(xiàn)一12組平均面積(55.94士9.42)emZ(每個(gè)本總面積264.52cmZ)，行配對(duì)，檢驗(yàn)兩組細(xì)胞膠原染色面有顯著性(t=4.7，尸<0.01)。1640組平均灰度(119.77士4.34)，組平均灰度(121.53士3.72)，行配對(duì)，檢驗(yàn)兩組細(xì)胞膠原染色度差異無顯著性(t一0.6，p>0.05)。兩組軟骨細(xì)胞膠原染色比見圖7、8:

(2)不同因子對(duì)去分化軟骨細(xì)胞影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果:IGF一1、GH、IGF一卜GH組去分化細(xì)胞在培養(yǎng)兩代后形態(tài)仍呈梭形為主(參見圖2)，GAG染色陰性(圖20)。TGF一pl組去分化細(xì)胞培養(yǎng)一周后細(xì)胞形態(tài)大部分恢復(fù)三角形和多邊形為主，GAG染色陽性。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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8 萬榮,楊慶銘,鄧廉夫,張s

本文編號(hào)：2616072