【摘要】： 對豬小腸蔗糖酶(Sucrase，E.C.3.2.1.26)在分離純化的基礎(chǔ)上，對其性質(zhì)進(jìn)行了初步研究。將豬小腸勻漿后的粗提取物進(jìn)行分段鹽析、DEAE-Sepharose柱層析及Sephacryl S-200、Sephadex G-200凝膠過濾等純化步驟，得到聚丙烯酰胺凝膠電泳為單一蛋白區(qū)帶，比活力為1.79units／mg蛋白的酶制品，經(jīng)12％SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳為一條區(qū)帶，該酶的亞基相對分子質(zhì)量為51000。等電聚焦顯示其等電點(pI)為6.7。氨基酸組成分析表明：豬小腸蔗糖酶由約477個氨基酸殘基組成，富含甘氨酸、谷氨酸、亮氨酸、門冬氨酸、蘇氨酸、纈氨酸、脯氨酸。圓二色譜(CD)對其二級結(jié)構(gòu)的分析顯示，蔗糖酶分子中α-螺旋占28.8％，β-折疊占27.9％，無規(guī)則卷曲占43.2％。通過動力學(xué)方法測得該酶的最適pH值為6.9，最適溫度為50℃，以蔗糖為底物的米氏常數(shù)K_m為18.9mmol／L。該酶在40℃以下時比較穩(wěn)定。用化學(xué)修飾法測得該酶的功能基團(tuán)是半胱氨酸的巰基，對氯汞苯甲酸(PCMB)對蔗糖酶的抑制作用為反競爭性抑制，其抑制常數(shù)K_i為0.75mmol／L。二巰基蘇糖醇(DTT)修飾，NR／R單向SDS-PAGE、NR／R雙向?qū)蔷�SDS-PAGE的結(jié)果均表明蔗糖酶分子內(nèi)沒有二硫鍵存在。 各種金屬離子對該酶的影響表現(xiàn)為：K~+、Fe~(2+)、CO~(2+)、Al~(3+)及Sb~(3+)對蔗糖酶活力影響不大；Zn~(2+)、Mg~(2+)、Mn~(2+)對蔗糖酶活力有不同程度激活作用，其中Zn~(2+)的激活作用最強：Li~+、Ni~(2+)、Ca~(2+)、pb~(2+)、Cd~(2+)、Hg~(2+)、Ag~+、Cr~(3+)及EDTA對蔗糖酶活力則有不同程度的抑制作用，其中Ag~(+)的抑制作用最強。在這些金屬離子中，過渡金屬離子Ni~(2+)、Mn~(2+)、Co~(2+)、Cu~(2+)、和Zn~(2+)在低濃度時對蔗糖酶有不同程度激活作用，隨離子濃度增大，，Zn~(2+)激活作用明顯加強，在含5mmol／L Zn~(2+)的反應(yīng)體系中酶活力為140％；Mn~(2+)、Co~(2+)激活作用增加不明顯；Ni~(2+)表現(xiàn)出輕微抑制作用；而 CU卜在隨其濃度上升過程中對酶活力的作用卻表現(xiàn)為先激活后抑制，在 含 lmmol／L CuZ”的反應(yīng)體系中酶活力增加了 13石％，在含 3mmol／L Cuy 的反應(yīng)體系中酶活力基本沒有改變，在含 smmol幾 Cuy的反應(yīng)體系中酶 活力被抑制了 41．7％。重金屬離子 Ag＼ Hgh、Cd卜對蔗糖酶活力的抑 制作用隨離子濃度增大而增加，smmol幾 Ag“可完全抑制蔗糖酶的活性。 EDTA對蔗糖酶活性的抑制作用隨其濃度增加呈線性增加。 中藥材中蒼術(shù)、桔梗、桑白皮、知母、五味子、麥冬、桑葉、淫羊 霍、丹皮、白術(shù)、烏梅、黃精、地黃、蒼耳于、玉米須、冤絲子、玄參、 澤瀉和玉竹的75％乙醇提取液對蔗糖酶有不同程度的抑制作用，其中蒼 術(shù)、桔梗、桑白皮提取液的抑制作用較強，0．lmllo％蒼術(shù)、桔梗、桑白 皮75％乙醇的提取液分別使酶活力下降了刀刀％、52．7％和52．6％；仙鶴 草、女貞子、天冬、石膏、人參和獲菩的75％乙醇提取液對蔗糖酶活力 影響不大；花粉、地骨皮、紅參、黃蔑、三七、山藥、黃蓮和丹參的75％ 乙醇提取液對蔗糖酶有不同程度的激活作用，其中丹參的激活作用最 強，0刁ml 10％丹參的75％乙醇提取液使酶活力增加了41％。調(diào)味料中 大蒜對蔗糖酶有輕微激活作用，姜和花椒對蔗糖酶的活力影響不大，而 辣椒和胡椒則有不同程度的抑制作用。其中胡椒堿對蔗糖酶的抑制作用 隨濃度增加而明顯加強。當(dāng)其濃度達(dá)到smmol幾時，蔗糖酶活力僅剩余 12．7％。背角無齒蚌多糖對蔗糖酶有很強的激活作用。且隨其濃度增加， 激活作用加強。當(dāng)其濃度達(dá)到sing加l時，蔗糖酶活力高達(dá)225％。
【學(xué)位授予單位】：四川大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2002
【分類號】：Q55

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 黃潔;梁建榮;蘇茉;高亞鵬;唐云明;;黑曲霉TH-2蔗糖酶的分離純化及部分性質(zhì)研究[J];西南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版);2011年02期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前5條

1 黃潔;黑曲霉TH-2蔗糖酶的分離純化及部分性質(zhì)與功能基團(tuán)研究[D];西南大學(xué);2011年

2 武忠亮;煙草葉片蔗糖酶的分離純化及部分性質(zhì)研究[D];西南大學(xué);2007年

3 李麗娟;氧化應(yīng)激對仔豬腸細(xì)胞葡萄糖轉(zhuǎn)運能力及轉(zhuǎn)運載體表達(dá)量的影響[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

4 余波;E22植酸酶的化學(xué)修飾及對其pH適性的影響研究[D];西南大學(xué);2008年

5 郭小路;薄荷幼葉蔗糖酶的分離純化及部分性質(zhì)與功能基團(tuán)研究和固定化初探[D];西南大學(xué);2008年

本文編號：2615141