【摘要】：研究背景與目的:同型半胱氨酸(Homocysteine,Hcy)是一種含硫氨基酸,體內不能合成,只能來源于蛋氨酸的分解代謝,在體內主要以蛋白結合形式存在。其生理作用主要是參與體內一碳單位的代謝。目前公認,體內Hcy濃度升高是導致心血管疾病的獨立危險因素之一。因此,對同型半胱氨酸在各種心腦血管疾病發(fā)病機制中所發(fā)揮作用的深入研究具有重要的理論和應用價值。研究表明,Hcy對血管內皮細胞的損傷作用是其致病機制的始動因素。但Hcy內皮損傷機制的研究沒有得出一個系統(tǒng)的有說服力的結論。本次研究的主要目的是利用蛋白質組學研究的理論和技術,對Hcy作用后的人臍靜脈內皮細胞(HUVEC)的蛋白質表達譜進行觀察和分析,尋找與Hcy作用相關的蛋白質改變,更全面的了解Hcy所引起的細胞內功能蛋白的變化,為Hcy致血管內皮損傷機制的研究提供新的數(shù)據。 材料與方法:運用流式細胞技術對Hcy作用后的HUVEC進行細胞凋亡檢測;用凋亡相關基因芯片技術獲得Hcy作用后的HUVEC凋亡相關基因表達譜,利用RT-PCR、Western Blot對其結果進行驗證,全面分析Hcy誘導血管內皮細胞凋亡的信號通路;采用2DE-MS技術路線對Hcy作用下的HUVEC蛋白質表達譜進行研究,并運用生物信息學數(shù)據庫對Hcy作用后發(fā)生改變的蛋白質進行功能分析和相互作用分析。
【圖文】：

理后提取細胞總RNA，并進行凋亡相關基因芯片檢測。芯片實驗分兩組，對照組(不加Hey)和實驗組(4ommol/LHey)。運用Superarray的芯片檢測試劑盒進行檢測，并用透射式圖象掃描儀采集原始圖像(如圖1一2所示)。然后用GEarryanaalyzer芯片分析軟件進行結果分析。以管家基因灰度值為標準，進行所有各點的標準化，獲得各點灰度值，結果如圖1一3所示。Hyc作用后各凋亡相關基因表達水平改變如圖1一4所示。經軟件分析后，最終獲得表達下調基因12個(詳見表1一1)，，表達上調基因16個(詳見表l一2)圖l一2cDNA雜交后基因芯片掃描圖a.對照組，b.實驗組。由圖可見，兩張芯片上部分點的信號強度存在顯著差異。第16頁共148頁

四川大學博十研究生學位論文b圖1一3基因芯片灰度分析結果示意圖a.對照組(omnjol/LHey)，b.實驗組(40nunol/LHey)。圖中所示為經標準化后的灰度值。第17頁共148頁
【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R543

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本文編號：2615215