【摘要】：出生時(shí)，卵母細(xì)胞處于第一次減數(shù)分裂前期，人卵巢內(nèi)約有100多萬(wàn)不成熟卵母細(xì)胞，青春期后，在內(nèi)源性促性腺激素作用下，不成熟卵母細(xì)胞成熟并排出，人的一生中僅有400多個(gè)卵子成熟并排出，絕大多數(shù)卵母細(xì)胞在發(fā)育中逐步退化閉鎖。募集那些退化的卵子將其在體外培養(yǎng)成熟(In vitro maturation，IVM)可提供有關(guān)卵泡發(fā)生及卵母細(xì)胞成熟的信息，，并為不孕婦女提供卵子，可以節(jié)省體外受精-胚胎移植(Invitro fertilization-embryo transfer，IVF-ET)中用于募集卵泡的藥物費(fèi)用，減少因這些藥物引起的卵巢過(guò)度刺激、體重增加、惡心、情緒不穩(wěn)及可能的遠(yuǎn)期并發(fā)癥，同時(shí)使病人復(fù)診次數(shù)減少，治療周期縮短。然而卵母細(xì)胞雖能在體外成熟、受精、胚胎移植后妊娠成功，但體外成熟率、受精率及妊娠率低。培養(yǎng)介質(zhì)會(huì)影響甚至改變哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞減數(shù)分裂的調(diào)節(jié)。自20世紀(jì)90年代以來(lái)，為了提高不成熟卵母細(xì)胞的體外成熟率和質(zhì)量，大量的學(xué)者研究通過(guò)向培養(yǎng)液中添加各種物質(zhì)來(lái)改善培養(yǎng)微環(huán)境以促進(jìn)未成熟卵母細(xì)胞的體外成熟。目前，各實(shí)驗(yàn)室所用的體外培養(yǎng)系統(tǒng)的成分各異，至今無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，尋求最佳培養(yǎng)系統(tǒng)，提高體外成熟卵母細(xì)胞的質(zhì)量及成熟率至關(guān)重要。 伴隨IVF-ET等人類助孕技術(shù)的發(fā)展，低溫保存技術(shù)起到了不可估量的作用。卵母細(xì)胞的冷凍保存可以避免胚胎凍存所涉及的法律、倫理、道德以及宗教等因素；為那些因病變需要切除卵巢的年輕未婚未育患者保存生育力提供最大的希望；冷凍未成熟卵母細(xì)胞可與體外培養(yǎng)技術(shù)結(jié)合，建立“未成熟卵母細(xì)胞庫(kù)”，為少卵、無(wú)卵、卵巢早衰等婦女提供卵子；為科研提供足夠數(shù)量的卵母細(xì)胞，并將進(jìn)一步推動(dòng)生物學(xué)、遺傳學(xué)、組織學(xué)等方面的發(fā)展。1977年，Whittingham首次凍存小鼠體內(nèi)成熟卵母細(xì) 鄭州人學(xué)2儀媽涌碩上畢業(yè)論文 胞獲得成功，揭開了卵母細(xì)胞冷凍的序幕。1986年Chen首次凍存人卵母細(xì)胞成功并 獲得妊娠26周胎兒，隨后對(duì)卵母細(xì)胞凍存進(jìn)行了大量的研究，但整個(gè)卵子凍存技術(shù) 進(jìn)展緩慢，迄今為止，卵母細(xì)胞凍存成功率低，凍存方法至今無(wú)統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，凍融的各 個(gè)壞節(jié)均可影響卵子的正常結(jié)構(gòu)和功能，導(dǎo)致隨后的存活率、受精率及胚胎發(fā)育率低。 影響卵母細(xì)胞凍存的因素很多，其中有卵母細(xì)胞發(fā)育階段及冷凍方法。成熟卵母細(xì)胞 處于減數(shù)分裂的 MH期，第一極體己經(jīng)排出，染色體排列在減數(shù)分裂紡錘體的赤道 板上，紡錘體微管的正常排列對(duì)染色體正確排列和分離是十分重要的，冷凍解凍過(guò)程 中，紡錘體易被細(xì)胞內(nèi)形成的冰晶損傷，引起染色體異常，導(dǎo)致受精和發(fā)育失敗。生 殖泡期(Germinal vesicl早，GV)期卵母細(xì)胞處于減數(shù)分裂的雙線期，尚未形成紡錘體， 出現(xiàn)染色體異常的可能性小，凍存未成熟卵母細(xì)胞似乎是更好的選擇。目前國(guó)外經(jīng)不 同冷凍方法超低溫冷凍保存人類成熟或不成熟卵母細(xì)胞產(chǎn)生的嬰兒己有出生，而國(guó)內(nèi) 卵母細(xì)胞的冷凍保存還處于起步階段。尚未見有關(guān)凍存小鼠及人GV期卵母細(xì)胞及對(duì) 其后體外成熟、受精和胚胎發(fā)育影響的系統(tǒng)研究報(bào)道。探討影響卵母細(xì)胞冷凍的因素， 尋求最佳冷凍時(shí)期和冷凍方法尤為重要。 本研究以小鼠為研究對(duì)象，一方面系統(tǒng)研究表皮生長(zhǎng)因子(EPidermal gro叭h facto幾EGF)、1 7p一雌二醇(1 7beta一estradiol，1 7p一E:)、丙酮酸及保留卵丘細(xì)胞對(duì)小鼠 GV期卵母細(xì)胞體外成熟、受精及隨后早期胚胎發(fā)育的影響，以期優(yōu)化IVM培養(yǎng)基， 為臨床提高人類卵母細(xì)胞成熟及受精后胚胎發(fā)育提供新的理論依據(jù)。另一方面探討常 規(guī)慢速冷卻/快速?gòu)?fù)溫及玻璃化法分別對(duì)GV及第二次減數(shù)分裂中期(MetaPhasell，M H)的卵母細(xì)胞復(fù)蘇、體外成熟、受精及早期胚胎發(fā)育的影響，旨在為卵母細(xì)胞的冷 凍保存尋找最佳的時(shí)期和最佳的冷凍保存方法，為其更好的應(yīng)用于人類提供新的理論 依據(jù)。 鄭州大學(xué)加04屆碩}畢業(yè)淪文 第一部分表皮生長(zhǎng)因子、17p雌二醇、丙酮酸及卵丘細(xì)胞 對(duì)小鼠卵母細(xì)胞體外成熟的影響 目的探討培養(yǎng)液中添加表皮生長(zhǎng)因子(EGF)、1 7p一雌二醇(1 7p·EZ)、丙酮 酸及保留卵丘細(xì)胞對(duì)小鼠生殖泡期(GV)卵母細(xì)胞體外成熟、受精及其胚胎發(fā)育的 影口向。 方法GV期卵母細(xì)胞來(lái)自8一12周、體重20一259的昆明雌性小白鼠。將收集到 的形態(tài)較好的GV期卵母細(xì)胞隨機(jī)分為5組:對(duì)照組:TCM199+lO%胎牛血清+7 SIU幾 FsH+o，sluzm一heG+o.osmg/ml青霉素+o.o75mg/ml鏈霉素;EGF組:對(duì)照組液 +l ong/m IEGF;1 7p一E:組:對(duì)照組+l，g/ml 1 7p一EZ;丙酮酸組:對(duì)照液十0.3mM丙 酮酸;EGF+17日一EZ+丙酮酸組:對(duì)照組液+1 ong/ml EGF+1 pg/ml 17p一EZ+o.3mM丙 酮酸。五組體外成熟液中，每組又分為卵丘細(xì)胞復(fù)合物(COC)及裸卵(DO)組。 培養(yǎng)24小時(shí)后，對(duì)已排出第一極體的卵母細(xì)胞行卵胞漿內(nèi)單精子顯微注射(ICSI)， 注射后4一5小時(shí)，觀察卵母細(xì)胞受精情況，受精后繼續(xù)培養(yǎng)5一6天，觀察成熟率、受 精率、卵裂率、2細(xì)胞、8細(xì)胞、�？芭呒澳遗咝纬汕闆r。 結(jié)果 1 EGF、17p一EZ、丙酮酸對(duì)DO組未成熟卵母細(xì)胞體外成熟的影響與對(duì)照 組相比，EGF組、EGF十17p·EZ+丙酮酸組DO的Mn率明顯高于對(duì)照組DO，尸0.05， 生殖泡破裂(GVBD)率、受精率、卵裂率、2細(xì)胞及8細(xì)胞
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R321

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前2條

1 邢冠琳;小鼠卵巢組織冷凍保存及卵泡體外培養(yǎng)的研究[D];鄭州大學(xué);2007年

2 杜文敬;小鼠卵母細(xì)胞及早期胚胎的玻璃化冷凍[D];東北林業(yè)大學(xué);2010年

本文編號(hào)：2611084