發(fā)布時(shí)間：2020-04-01 14:20

【摘要】：骨形態(tài)發(fā)生蛋白-7(BMP-7)又稱為成骨蛋白-1(OP-1)屬于轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β(TGF-β)超家族。BMP-7是由431個(gè)氨基酸組成的糖蛋白，其信號(hào)肽和前結(jié)構(gòu)域分別有29個(gè)和263個(gè)氨基酸，在Arg-292與Ser-293之間斷裂后，釋放出由139個(gè)氨基酸組成的成熟肽，體內(nèi)以同二聚體的方式來(lái)完成其生物學(xué)功能。在組織水平，，BMP-7成熟肽與Ⅰ型膠原蛋白緩釋體移入骨干缺損部位后，能夠促進(jìn)新骨生成，顯示出應(yīng)用于骨、關(guān)節(jié)及軟骨缺陷修復(fù)的良好前景。在細(xì)胞水平，BMP-7成熟肽可以促進(jìn)成骨細(xì)胞與軟骨細(xì)胞分化。除此之外，BMP-7在胚胎發(fā)育、器官發(fā)生與功能形成過程中起到了重要的調(diào)節(jié)作用。因此，利用基因工程的方法生產(chǎn)BMP-7成熟肽不僅可以服務(wù)于基礎(chǔ)研究，而且具有很好的臨床應(yīng)用價(jià)值。 擴(kuò)增出BMP-7成熟肽編碼序列片段(877bp-1293bp)，此片段經(jīng)BamHⅠ、PstⅠ酶切處理后定向克隆入表達(dá)載體pQE30。重組表達(dá)載體pQE30／BMP-7轉(zhuǎn)化入大腸桿菌M15[pREP4]中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。6xHis-BMP-7融合蛋白分子量為16.78kD,主要以包涵體形式存在，可被人BMP-7多克隆抗體識(shí)別。經(jīng)表達(dá)條件優(yōu)化后，該融合蛋白占菌體總蛋白的41.95％。在變性條件下，通過Ni-NTA金屬螯合親合層析柱對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行初步純化，再經(jīng)梯度透析進(jìn)行復(fù)性，得到該融合蛋白的純品，產(chǎn)量約為58.8mg／L培養(yǎng)基。該融合蛋白能夠使人成骨肉瘤細(xì)胞系MG63細(xì)胞中的堿性磷酸酶活性升高，且呈劑量依賴性關(guān)系。證實(shí)該重組融合蛋白在體外具有BMP-7生物學(xué)活性。
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：2610570