【摘要】：艾滋病(AIDS)是由人類免疫缺陷病毒(HIV-1和HIV-2，主要為HIV-1)感染引起的一種后天性人類免疫缺陷綜合征。目前用于抑制HIV-1的治療藥物主要針對病毒反轉(zhuǎn)錄酶和蛋白酶。盡管這些藥物可以減緩HIV-1感染者向AIDS患者發(fā)展的進程，但長期使用存在副作用大、價格昂貴、易產(chǎn)生耐藥性等缺點。因此，尋找有效而安全的治療AIDS的藥物成為當務(wù)之急。 隨著對HIV-1進攻靶細胞過程的深入了解，人們不斷發(fā)現(xiàn)新的極具吸引力的藥物靶點，并為研制有效疫苗提供了新的策略。HIV-1屬于囊膜病毒，其囊膜蛋白復(fù)合物控制著病毒進入靶細胞的關(guān)鍵步驟，即決定著病毒趨向性和促進病毒基因組進入靶細胞以及感染細胞與鄰近的非感染的細胞之間的膜融合過程。 介導(dǎo)病毒膜與靶細胞膜融合的關(guān)鍵分子是HIV-1囊膜糖蛋白 第四軍醫(yī)大學碩士學位論文 gp41，其結(jié)構(gòu)相對保守，針對gP41的藥物可能避免耐藥性的形成， 是抑制病毒進入靶細胞的理想靶位。gp41的晶體結(jié)構(gòu)已經(jīng)明確， 其融合活性構(gòu)象的核心結(jié)構(gòu)是一個由三個發(fā)卡結(jié)構(gòu)緊密排列而成 的六聚體螺旋束，gP41的N端螺旋形成中心的三聚體，而C端螺 旋以反平行方式堆積在N端螺旋形成的疏水槽表面，組成外層的 三聚體螺旋。該空間構(gòu)象己被證實是促使病毒與靶細胞膜融合的 關(guān)鍵構(gòu)象，結(jié)構(gòu)十分穩(wěn)定。 Nsl(L6)e46和N36(L6)e34均為模擬gp41融合態(tài)核心結(jié)構(gòu) 空f司構(gòu)象的合成膚。Nsl(L6)C46是在N36(L6)C34基礎(chǔ)上在C末 端增加了一個含有中和表位ELDKWA序列的12月太序列。它們的 一級序列與具有抑制活性的C多膚重疊。Jiang等針對 N36(L6)C34合成膚研制了單克隆抗體(MAb)NC一1。該MAb 能特異識別Hlv一1 gp41六股。一螺旋束核心結(jié)構(gòu)空間構(gòu)型，但未顯 示中和活性。 本研究首先運用原核表達系統(tǒng)表達了N51(L6)C46多膚，并 用能特異識別Hlv一1 gP41三聚體特征性的六股。一螺旋束核心結(jié) 構(gòu)空間構(gòu)型的MAb NC一l進行Western blot鑒定，，證實Nsl(L6)C46 多膚單體(14KDa)及其三聚體(36KDa)與MAb NC一1反應(yīng)， 提示該多膚可形成gp41核心結(jié)構(gòu)空間構(gòu)型特征，結(jié)構(gòu)穩(wěn)定，SDS、 二琉基乙醇的存在并不影響其空間構(gòu)型的形成，可作為制備針對 gP41核心結(jié)構(gòu)空間構(gòu)型MAb的免疫原。 采用Nsl(L6)e46多膚免疫小鼠制備了針對N51(L6)e46多膚 的4株MAb，其中MAb 1 AZ、IA4和IBg針對多膚單體，MAb 3AI 針對多膚三聚體。利用ELISA間接夾心法進一步鑒定了MAb的 特異性，包被兔抗N36(L6) C34抗體，特異吸附多膚后再檢測 雜交瘤細胞培養(yǎng)上清，結(jié)果顯示這4株抗體都不同程度地與兔抗 N36(L6) C34捕獲的抗原反應(yīng)，證實它們能特異識別表達多膚， 但這4株MAb不與單獨的N36或C34多膚片段反應(yīng)，提示它們 3 第四軍醫(yī)大學碩士學位論文 是抗多膚空間構(gòu)象的MAb。將這4株MAb與MAb NC一1的抗體 相對親和力作比較，其高低依次為NC一1IB9IA23AIIA4。位 點相加和競爭ELISA法分析其抗原表位，發(fā)現(xiàn)這4株MAb與MAb NC一1識別的抗原表位近似，但也存在一些差異。其中識別多膚單 體的MAb 1 AZ、1 A4、1 Bg和MAb NC一l識別的抗原表位較接近， 而識別多膚三聚體的MAb 3AI與其它4株抗體識別表位差異均相 對較大。 上述4株MAb有可能成為篩選抗Hlv多膚及分析gp41表位 免疫原特性的有效工具。
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2004
【分類號】：R346

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 李春生;吳萌;李君華;齊穎穎;李玉靜;閆靜輝;;抗沙丁胺醇單克隆抗體制備與鑒定[J];安徽農(nóng)業(yè)科學;2011年10期

2 張葵;汪濤;李琦;莊然;宋朝君;李永明;金伯泉;;小鼠抗兔IgG單克隆抗體的制備與應(yīng)用[J];標記免疫分析與臨床;2008年01期

3 黃濤;張鋼林;李楠;;巴戟天多糖對體外培養(yǎng)兔軟骨細胞凋亡的影響[J];北京體育大學學報;2010年08期

4 張穎妹;王應(yīng);徐茜梅;呂冰峰;馬大龍;;利用NF-κB轉(zhuǎn)錄活性螢光素酶報告系統(tǒng)檢測白細胞介素1及白細胞介素1受體拮抗劑的生物活性[J];北京大學學報(醫(yī)學版);2006年06期

5 張偉,蔣耀光,謝志堅,張宇,胡承香,李磊;嚴重胸部創(chuàng)傷對肺泡巨噬細胞免疫功能的影響[J];重慶醫(yī)學;2004年12期

6 劉睿,李柱一,張琪,王桂平,劉津平,鞠躬;重癥肌無力大鼠膈肌運動終板的形態(tài)學研究[J];第四軍醫(yī)大學學報;2005年02期

7 季剛;林艷;王為忠;管文賢;牛衛(wèi)博;;OX34預(yù)防大鼠小腸移植急性排斥反應(yīng)[J];第四軍醫(yī)大學學報;2006年02期

8 趙增仁;李勇;田延峰;張麗靜;張峰;李芳;;腫瘤抗原致敏DC誘導(dǎo)T淋巴細胞增殖及殺傷效率[J];第四軍醫(yī)大學學報;2008年12期

9 孫元杰;宋朝君;魏玉英;張

本文編號：2611126