【摘要】：一、目的 (一)擬體外在集落水平上建立有效培養(yǎng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的一條技術(shù)路線。 (二)進(jìn)一步研究人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖、分化等生物學(xué)特性，為問充質(zhì)干細(xì)胞作為“種子細(xì)胞”在細(xì)胞移植和支持造血方面的臨床應(yīng)用奠定基礎(chǔ)。 二、方法 (一)以健康自愿者骨髓為實驗對象，密度梯度離心法和貼壁法結(jié)合篩選骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，以套圈法獲取骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞集落擴(kuò)增培養(yǎng)。 (二)檢測人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性：包括1、hMSCs的表面標(biāo)記檢測；2、hMSCs的生長曲線測定，分別檢測了P3、P8、16、P17代MSCs；3、克隆形成能力的檢測，分別檢測了P3、P8、16、P17代細(xì)胞；4、MSCs的凍存和復(fù)蘇； (三)應(yīng)用RA誘導(dǎo)hMSCs向神經(jīng)干細(xì)胞的分化。 三、結(jié)果 (一)本實驗所用培養(yǎng)方法能有效擴(kuò)增集落來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，細(xì)胞倍增時間約為48～72h。傳15代即使擴(kuò)增的細(xì)胞總數(shù)達(dá)到(1～3)×10~(10)數(shù)量級。繼續(xù)傳代可傳20代。 (二)流式細(xì)胞儀檢測示細(xì)胞表達(dá)CD13、CD29、CD59、CD44、CD71而不表達(dá)CD11、CD14、CD31、CD34、CD38、CD45、CD80、CD86、CD117，表明它是間充質(zhì)干細(xì)胞而不是造血細(xì)胞。細(xì)胞的表面標(biāo)記顯示擴(kuò)增的是骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞且純度達(dá)97％以上，可視為集落來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。 (三)生長曲線示培養(yǎng)的細(xì)胞17代以前生長良好，17代以后細(xì)胞 生長明顯變慢，光鏡下形態(tài)變大、形狀變?yōu)椴灰?guī)則，胞漿內(nèi)及培養(yǎng)液中 可見較多顆粒，折光性差。克隆形成能力數(shù):MsCsl7代前3、8、16無 明顯差異(P0.05)，17代后克隆形成能力降低，與17代前數(shù)代比有顯 著性的差異(P0.05)。 (四)常規(guī)凍存方法能有效保存細(xì)胞，復(fù)蘇后活細(xì)胞達(dá)96%以上， 細(xì)胞生長傳代良好。 (五)體外誘導(dǎo)分化能力檢測顯示培養(yǎng)的細(xì)胞保持其分化潛能，可 分化成神經(jīng)干細(xì)胞，誘導(dǎo)比例分別為25.6%。 四、結(jié)論 (一)本實驗所用培養(yǎng)方法能有效擴(kuò)增集落來源的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞， 經(jīng)表面標(biāo)記檢測、體外維甲酸(RA)誘導(dǎo)分化神經(jīng)干細(xì)胞實驗證實為 MSCs。細(xì)胞的生長曲線和克隆形成實驗顯示MSCS是一種生命力有限的 細(xì)胞。 (二)本實驗方法簡便可靠，擴(kuò)增培養(yǎng)的細(xì)胞生長良好達(dá)(1一3) x 10’“數(shù)量級，并具有向神經(jīng)干細(xì)胞定向誘導(dǎo)分化的潛能，不僅可以作 為“種子細(xì)胞”用于實驗研究，還可滿足臨床細(xì)胞移植所需，有一定先 進(jìn)性。
【學(xué)位授予單位】：第一軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2609731