【摘要】：目的：構(gòu)建攜帶sCD80-Linker-sCD40L融合基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體。方法：在GenBank檢索人CD80、CD40L及IL-12b基因編碼序列，確定擴(kuò)增區(qū)域，設(shè)計引物。以Trizol抽提人外周血單個核細(xì)胞總RNA，使用RT-PCR方法獲得IL-12b信號肽、sCD80、sCD40L等基因的編碼序列，并分別克隆入T載體。重疊PCR構(gòu)建sCD80-Linker-sCD40L融合基因，克隆入T載體。使用Stratagene公司AdEasy XL Adenoviral Vector System試劑盒構(gòu)建攜帶sCD80-Linker-sCD40L融合基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體。空斑實(shí)驗(yàn)檢測病毒滴度，Westen blot測定蛋白表達(dá)。結(jié)果：經(jīng)測序證實(shí)，正確克隆了人IL-12b信號肽、sCD80、sCD40L編碼序列，構(gòu)建了攜帶sCD80-Linker-sCD40L融合基因的T載體，并進(jìn)一步構(gòu)建了攜帶該融合基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體。本實(shí)驗(yàn)病毒滴度為2×10~(10)cfu／ml。Westen blot表明該融合蛋白被正常表達(dá)。結(jié)論：成功構(gòu)建了攜帶sCD80-Linker-sCD40L融合基因的復(fù)制缺陷型腺病毒載體，可以進(jìn)一步進(jìn)行體內(nèi)和體外轉(zhuǎn)染實(shí)驗(yàn)。
【圖文】：

天津醫(yī)科大學(xué)碩士研究生論DLZ000(自上至下):2000、1000、750、500、2IL一12bsig編碼序列:87bpsCD80編碼序列:670bpIL一12bsig一sCD80編碼序列:730bpsCD40L編碼序列:479bpIL一12bsig一sCD8o一Linker一sCD4oL編碼序列:1237bDL15000(自上至下):15000、10000、7500、5四、重組T載體酶切鑒定和重組Shuttle載體酶切

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【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號】：R346

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 劉曉平,區(qū)慶嘉,黃洪蓮,王小寧;B7修飾的肝癌細(xì)胞疫苗對細(xì)胞因子產(chǎn)生的研究[J];中華肝膽外科雜志;2000年01期

2 袁愛力,張智翔,肖麗萍,侯淑琴;B_7基因轉(zhuǎn)染治療原發(fā)性肝癌的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華內(nèi)科雜志;1997年01期

本文編號：2609381