【摘要】：細(xì)胞免疫是機(jī)體抗腫瘤最主要的方式。細(xì)胞免疫主要由Th1細(xì)胞及其細(xì)胞因子負(fù)責(zé)。但是在腫瘤進(jìn)行生長(zhǎng)時(shí)間，腫瘤細(xì)胞直接或間接抑制特異T細(xì)胞功能，導(dǎo)致Th1細(xì)胞功能低下。因此，要獲得有效的抗腫瘤效應(yīng)，活化Th1細(xì)胞是一個(gè)重要途徑。如何增強(qiáng)人體的Th1免疫細(xì)胞因子的產(chǎn)生，是腫瘤生物治療的關(guān)鍵。長(zhǎng)期的實(shí)驗(yàn)研究和臨床觀察發(fā)現(xiàn)磨損顆�？杉せ罹奘杉�(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子，如IL-1、IL-6、TNF-α等，其磨損顆粒大小一般為0.5-300μm。現(xiàn)行研究的免疫佐劑中，納米級(jí)佐劑-抗原復(fù)合物，都能很好的引起細(xì)胞免疫反應(yīng)。如果，用無(wú)毒的、可降解的納米級(jí)顆粒刺激免疫細(xì)胞必將產(chǎn)生一些細(xì)胞因子，將對(duì)腫瘤細(xì)胞有一定的免疫治療作用。 目的 探討可降解與不可降解的納米級(jí)顆粒是否能刺激Balb/C小鼠脾細(xì)胞和人外周血單個(gè)核細(xì)胞增殖及是否促使其分泌IL-2及IFN-α。 材料與方法 實(shí)驗(yàn)細(xì)胞用小牛血清濃度為10%的以IMDM培養(yǎng)液調(diào)成5×106/ml的Balb/c小鼠脾細(xì)胞懸液與用Ficoll分層離心法從年輕、健康女性的外周血分離的細(xì)胞濃度為1×106/ml的人單個(gè)核細(xì)胞懸液。 用不可降解的100nm、200nm左右的聚苯乙烯微球、10μm左右的二氧化硅顆粒、可降解的50nm左右殼聚糖或100nm左右的殼寡糖顆粒與Balb/c小鼠脾細(xì)胞或人外周血單個(gè)核細(xì)胞在37℃ 5% CO2飽和濕度條件下共同孵育24小時(shí)、48小時(shí)。24小時(shí)后用CTLL-2細(xì)胞株或細(xì)胞病變抑制法檢測(cè)上清溶液中的白細(xì)胞介素-2（IL-2）和α干擾素（IFN-α）及含量。48小時(shí)后用MTT法或3H～TdR摻入法檢測(cè)納米級(jí)顆粒對(duì)Balb/c小鼠脾細(xì)胞或人單個(gè) WP=39 核細(xì)胞的促增值作用。 結(jié)果 200nm左右的聚苯乙烯微球濃度在40.625 ~325μg/ml時(shí)；100nm 左右的聚苯乙烯微球濃度在40.625 ~162.5μg時(shí)對(duì)Balb/c小鼠脾細(xì)胞及人單個(gè)核細(xì)胞有促增殖作用(P ＜0.05），并濃度各在162.5μg/ml、 81.25μg/ml時(shí)促增殖作用最明顯(P ＜0.01）。并產(chǎn)生IL-2及IFN-α，與促細(xì)胞增殖程度相符；可降解的50nm左右的殼聚糖在1.25~40μg/ml時(shí)；100nm左右的的殼寡糖顆粒在1.25~20μg/ml時(shí)對(duì)Balb/c小鼠脾細(xì)胞及人單個(gè)核細(xì)胞有促增殖作用(P ＜0.05），濃度均在2.5μg/m時(shí)促增殖作用最明顯 (P ＜0.01)，并產(chǎn)生IL-2及IFN-α，其含量與促細(xì)胞增殖程度相符。10μm左右的二氧化硅顆粒在任何濃度下對(duì)小鼠脾細(xì)胞無(wú)增值作用。 結(jié)論 納米級(jí)顆粒對(duì)Balb/c小鼠脾細(xì)胞及人外周血單個(gè)核細(xì)胞促增殖作用；納米級(jí)顆粒刺激人外周血單個(gè)核細(xì)胞，促使其分泌細(xì)胞因子IL-2及IFN-α；納米級(jí)顆�？梢源碳っ庖呒�(xì)胞，引起Th1細(xì)胞免疫，這將在抗腫瘤的治療中發(fā)揮關(guān)鍵的作用。
【圖文】：

攪拌速度200～300 r/min. 在75 ℃的水浴中,反應(yīng)24h后,得到穩(wěn)定的表面富集季胺鹽的交聯(lián)聚苯乙烯微球的乳液. 利用離心,再分散和滲析等方法純化聚苯乙烯微球。表征為如圖1TEM圖象所示直徑各為200nm左右、100nm左右，且聚苯乙烯顆粒呈較均勻的球形且表面光滑.并已單分子的形式均勻的分散在溶液中[18]。先用D-Hank，s液配成50mg/ml，高溫、高壓消毒， 4℃保存，用前稀釋。由吉林大學(xué)超分子結(jié)構(gòu)與材料教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供2、二氧化硅顆粒：不可降解的二氧化硅顆粒直徑在 10μm 左右，，先用D-Hank，s 液配成 10mg/ml，高溫、高壓消毒， 4℃保存，用前稀釋。吉林大學(xué)超分子結(jié)構(gòu)與材料教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室提供

吉林大學(xué)碩士學(xué)位論文 納米顆粒免疫刺激作用的初步研究3、殼聚糖顆粒 ：殼聚糖是由N-乙酰氨基葡萄糖聚合而成的多糖-甲殼質(zhì)經(jīng)脫乙�；幚砗蟮玫�。如圖2所示其直徑在50nm左右，表面光滑，呈球形，先用D-Hank，s液配成25.6mg/ml，高溫、高壓消毒， 4℃保存，用前稀釋。殼聚糖具有多種生物活性，具有生物相容性好，可被體內(nèi)多種酶類(lèi)降解，降解產(chǎn)物完全無(wú)毒，并能被生物體完全吸收，有很強(qiáng)的免疫調(diào)節(jié)及抗腫瘤作用[18、19]。濟(jì)南海得貝海洋生物有限公司提供。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2608585