發(fā)布時(shí)間：2020-03-30 14:01

【摘要】： 目的了解溶血磷脂酸(LPA)對(duì)體外星形膠質(zhì)細(xì)胞(AS)增殖和血腦屏障(BBB)模型通透性改變的影響，并探討其可能機(jī)制。 方法1、AS隨機(jī)分為空白對(duì)照組、小劑量二辛烷甘油焦磷酸鹽(DGPP)組、大劑量DGPP組、百日咳毒素(PTX)組、LPA組、大劑量DGPP+LPA組、小劑量DGPP+LPA組和PTX+LPA組；MTT和流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)AS增殖，鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)檢測(cè)AS胞內(nèi)F-actin變化；2、為探討LPA促AS增殖機(jī)制，將AS隨機(jī)分為空白對(duì)照組、Ro31-8220組、佛波脂(PMA)組、LPA組、Ro31-8220+PMA組和Ro31-8220+LPA組；同前法檢測(cè)AS增殖和細(xì)胞內(nèi)F-actin變化，F(xiàn)ura-2／AM檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，Western Blot檢測(cè)AS內(nèi)蛋白激酶C-α(PKC-α)和低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的表達(dá)；3、為了解LPA對(duì)血腦屏障(BBB)通透性影響，將體外培養(yǎng)的BBB模型分為空白對(duì)照組、LPA組和Ro31-8220+LPA組；γ計(jì)數(shù)儀檢測(cè)BBB模型對(duì)~(125)Ⅰ-牛血清白蛋白(~(125)Ⅰ-BSA)的通過率，電子顯微鏡觀察血腦屏障-緊密連接(BBB-TJ)改變，Phalloidin檢測(cè)F-actin變化，F(xiàn)CM檢測(cè)PKC-α陽性細(xì)胞比例，Western Blot檢測(cè)BBB-TJ內(nèi)claudin-5表達(dá)。 結(jié)果1、LPA可使AS存活率以及S期細(xì)胞比例增加，，AS形態(tài)改變，且以10μmol／L濃度LPA效果最佳；2、DGPP和PTX預(yù)處理可降低AS存活率以及S期細(xì)胞比例，與LPA組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，但大劑量DGPP+LPA組較小劑量DGPP+LPA組抑制作用明顯(P＜0.01)；3、LPA促使AS內(nèi)[Ca~(2+)]_i濃度、PKC-α以及HIF-1α表達(dá)增加，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)；Ro31-8220+LPA組除HIF-α表達(dá)仍增加外，[Ca~(2+)]_i濃度和PKC-α表達(dá)均減少，與LPA組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)；4、LPA可使BBB模型~(125)Ⅰ-BSA通過率和PKC-α表達(dá)增加，claudin-5表達(dá)減少，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)，同時(shí)LPA使BBB-TJ開放，細(xì)胞內(nèi)F-actin重組；而Ro31-8220預(yù)處理后，LPA的上述能力均有所減弱。 結(jié)論1、LPA經(jīng)LPA_(1/3)-G_(i/o)蛋白偶聯(lián)受體促進(jìn)AS增殖和形態(tài)改變，其機(jī)制可能與PKC-α／Ca~(2+)信號(hào)途徑以及HIF-1α相關(guān)；2、LPA可促進(jìn)BBB-TJ開放，增加BBB通透性，其機(jī)制可能與PKC-α信號(hào)途徑激活進(jìn)而促使claudin-5表達(dá)下調(diào)以及F-actin重組有關(guān)。
【圖文】：

一H工F一la蛋白表達(dá)光密度值圖1一2一4WesternBlot顯示各組HIF一la

附圈1·l-2附圖1一2-1附圖1·2一2附圖卜l幣附圈1一2一3附圖卜2-4空白對(duì)照組，Ro31一8220組細(xì)胞排列緊密相互融合成膠狀 (x300)，與空白對(duì)照組比較無明顯變化 (x300)PMA組，細(xì)胞明顯回縮圓化、觸角形成，細(xì)胞間隙增寬LPA組，細(xì)胞回縮、觸角形成，細(xì)胞間隙增寬 (x300)Ro31一8220+PMA組，變形細(xì)胞數(shù)目減少，變形程度減弱Ro31一8220十L隊(duì)組，變形細(xì)胞數(shù)目減少，變形程度減弱( x300) x300) x300)
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R363

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本文編號(hào)：2607636