發(fā)布時間：2020-03-31 06:07

【摘要】： PDIP1(polymerase delta-interacting protein 1)基因是在人HepG2細胞中克隆的一個基因。初步證實了PDIP1基因能與DNA聚合酶δ的小亞基p50和輔助蛋白PCNA相互作用。因此推測，PDIP1蛋白可能部分協(xié)助或參與DNA的復制和修復。此外，通過BLAST檢索發(fā)現(xiàn)PDIP1蛋白與一個受TNF-α誘導的蛋白質(zhì)B12十分相似，彼此的氨基酸序列高達70％是相同的。因此，推測PDIP1蛋白質(zhì)可能與之有相似的生物功能。TNF-α是由激活的巨噬細胞產(chǎn)生的細胞激活素，能誘導細胞凋亡，特別是對腫瘤細胞。而B12在細胞凋亡過程中也有一定的作用。因此，PDIP1可能在細胞凋亡中也起到一定的作用。TNF-α的另一個重要功能是在肝臟受傷后啟動肝臟再生。因此PDIP1基因也可能在肝臟再生過程中有一定的功能。 為了進一步研究PDIP1基因?qū)毎蛲�、肝臟再生的作用，我們首先采用RACE PCR的方法克隆了小鼠PDIP1基因的cDNA全長。小鼠PDIP1基因cDNA全長為1677bp，編碼329個氨基酸殘基。通過生物信息學分析，我們得知小鼠PDIP1基因位于7號染色體的F3位點上，，可能是一個轉(zhuǎn)錄因子在細胞核內(nèi)發(fā)揮生物功能。并且得知哺乳動物體內(nèi)存在一個PDIP1基因家族，此家族至少含有三個基因，分別命名為PDIP1-α、PDIP1-β、PDIP1-γ。我們設計合適的探針，采用核酸酶保護反應等技術(shù)測定了PDIP1-α基因在肝臟部分切除后不同時間在小鼠肝臟中的表達，發(fā)現(xiàn)PDIP1-α基因在肝臟部分切除后表達增強，12小時表達最強，以后表達減弱。初步表明該基因?qū)Ω闻K損傷后的修復與再生有關(guān)。
【圖文】：

IPI基因序列(AF4O1315)檢，發(fā)現(xiàn)有兩個EST序列人的PDIPI基因高度同源。A高度同源，AA546545與人l一3)。而且Als49007和AA，推斷兩者位于同一基因上端序列設計兩個基因特異引NA的5’末端，根據(jù)AA5465引物，用RacePCR擴增基二二=井二二三些畢全=二=千===二石二二二二二二共二二二二二30405O6O7O

以01190(dT)18和巢式引物GSP3一2為第二輪PCR引物，擴增出的小鼠PDIPI基因cDNA3’端，其產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳顯示獲得一條大約60Obp的特異性條帶(圖1一4)。目的條帶經(jīng)測序得知，其序列長為605bp。以01190(dT)18和巢式引物GSPS一2為第二輪PCR引物，擴增出的小鼠PDIPI基因cDNAS’，其產(chǎn)物經(jīng)凝膠電泳顯示獲得一條大約450bp的特異性條帶(圖1一5)。目的條帶經(jīng)測序得知，其序列長為470bp。油pp0艾1圖1一4cDNA3’擴增產(chǎn)物l、2、3號泳道600bp處的特異性條帶為。DNA3’擴增產(chǎn)物圖1一scDNAS’擴增產(chǎn)物2、3號泳道45Obp處的特異性條帶為cDNAS’擴增產(chǎn)物2.4cDNA全長序列的拼接根據(jù)測序得到的3’端和5’端序列，并結(jié)合AI849007和AA546545兩個EST序列進行cDNA全長序列的拼接，獲得小鼠PDIPI基因cDNA全長序列。檢索NCBI的小鼠基因庫，得知其為一新序列
【學位授予單位】：湖南師范大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2003
【分類號】：Q78

【參考文獻】

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1 汪思應,程潔,鄭紅,張平,張寶霆,許望翔,魏漢東,楊曉明;一株與大鼠肝細胞再生相關(guān)的新cDNA克隆[J];中國病理生理雜志;2002年06期

本文編號：2608682