本文關(guān)鍵詞：Wip1基因敲除對間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：MSC(mesenchymal stem cell,MSC)是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細(xì)胞,它可以向成骨細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、肌細(xì)胞等分化,以MSC移植是治療組織損傷修復(fù)理想的根治手段,因此闡明MSC的作用機(jī)制十分重要。Wip1(Wild type p53-induce phospatase 1)是一種依賴于p53高表達(dá)的新型原癌基因,參與多種信號通路調(diào)控,在細(xì)胞穩(wěn)態(tài)調(diào)控、DNA損傷修復(fù)、腫瘤發(fā)生、抗衰老及免疫調(diào)控等方面發(fā)揮重要作用。最近有研究表明,Wip1可抑制MSC的增殖進(jìn)而增強(qiáng)MSC的遷移能力。然而目前尚無研究報道Wip1基因?qū)SC生物學(xué)特性及免疫調(diào)控功能的影響。為此本研究利用Wip1基因敲除小鼠,分離獲得骨實質(zhì)來源MSC用以探究Wip1基因?qū)SC生物學(xué)特性及免疫學(xué)特性的影響。我們首先從Wip1野生型和基因敲除型小鼠中分離得到Wip1野生型(WT)和基因敲除型(Wip1-/-)MSCs,通過倒置顯微和CCK-8法觀察和檢測MSCs的生長特性,流式細(xì)胞術(shù)檢測MSCs的細(xì)胞表型和細(xì)胞周期;采用油紅O染色、堿性磷酸酶染色和von Kossa染色法檢測MSCs的誘導(dǎo)分化能力,熒光定量PCR(quantitative real-time polymerase chain reaction,Q-PCR)檢測成脂和成骨分化表達(dá)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子。將MSCs與樹突狀細(xì)胞(dendritic cells,DCs)共培養(yǎng),采用淋巴母細(xì)胞轉(zhuǎn)化實驗(Lymphocyte transformation test,LTT)、混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)實驗(Mixed lymphocyte reaction,MLR)檢測MSCs對T淋巴細(xì)胞增殖能力的影響,異基因小鼠皮瓣移植實驗檢測Wip1敲除對MSCs免疫抑制功能的影響。研究結(jié)果表明,利用骨片法可分離獲得Wip1-WT MSCs和Wip1-/-MSCs,兩種MSCs均具有成纖維樣的細(xì)胞形態(tài);流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞表型,均陽性表達(dá)Sca-1,CD29,CD105,陰性表達(dá)CD31,CD34,CD45,和MHCII;上述結(jié)果提示,Wip1基因敲除不影響MSCs的細(xì)胞形態(tài)和表型。CCK-8檢測MSCs生長特性,結(jié)果顯示,Wip1缺失可顯著地抑制MSCs的增殖,使其阻滯于G2期,增殖速度減慢。誘導(dǎo)分化實驗結(jié)果表明,兩種MSCs均具有成脂和成骨分化能力,Wip1缺失可顯著降低MSCs的成脂和成骨的分化能力,且相關(guān)的關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子C/EBPα、PPARγ、Runx2和Osteocalcin的表達(dá)亦顯著降低(*p0.05)。LTT法和MLR法檢測MSCs免疫功能,結(jié)果表明,Wip1-/-MSCs可顯著抑制T淋巴細(xì)胞增殖,且具有劑量依賴性(*p0.05)。將MSCs與DCs共培養(yǎng),結(jié)果顯示W(wǎng)ip1-/-MSCs抑制DCs成熟的能力顯著降低。異基因小鼠皮瓣移植體內(nèi)實驗亦表明Wip1-/-MSCs的免疫抑制能力顯著下降。上述實驗結(jié)果提示,Wip1作為調(diào)控MSCs生物學(xué)特性和免疫功能的新型調(diào)控子,在未來MSCs的臨床應(yīng)用中將發(fā)揮重要作用。
【關(guān)鍵詞】：Wip1 間充質(zhì)干細(xì)胞 生物學(xué)特性 免疫調(diào)控功能
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 英文縮寫9-10
• 前言10-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-27
• 附圖27-38
• 附表38-40
• 討論40-44
• 結(jié)論44-45
• 參考文獻(xiàn)45-51
• 綜述51-60
• 參考文獻(xiàn)56-60
• 致謝60-61
• 個人簡歷61

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉德培，方福德，梁植權(quán);基因敲除[J];生理科學(xué)進(jìn)展;1995年01期

2 石東喬;“基因敲除”研究進(jìn)展[J];自然雜志;1996年01期

3 熊鷹;基因敲除與學(xué)習(xí)、記憶:現(xiàn)狀、問題和展望[J];生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展;1998年06期

4 楊曉;;“基因敲除”敲開諾獎之門[J];華夏地理;2007年11期

5 呂飛;;淺談“基因敲除”[J];生物學(xué)教學(xué);2010年10期

6 王曉敏;侯占銘;;“基因敲除”技術(shù)的研究與應(yīng)用[J];考試周刊;2013年87期

7 Qian XU;Cong-yi ZHU;Ming-shang WANG;Xue-peng SUN;Hong-ye LI;;一種高效的柑橘綠霉菌基因敲除體系的構(gòu)建(英文)[J];Journal of Zhejiang University-Science B(Biomedicine & Biotechnology);2014年02期

8 賀松;張德純;;基因敲除方法及其應(yīng)用[J];中國微生態(tài)學(xué)雜志;2009年02期

9 趙麗華;梁浩;云亭;李榮鳳;;牛肌肉生長抑制素基因敲除打靶載體的構(gòu)建[J];中國農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年02期

10 杜慶林;樊祥宇;毛金校;謝建平;;分枝桿菌中基因敲除操作工具研究進(jìn)展[J];遺傳;2012年07期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 賀松;張德純;;基因敲除方法及其應(yīng)用[A];重慶市預(yù)防醫(yī)學(xué)會2009年論文集[C];2009年

2 王景;穆媛媛;黎庶;陳志瑾;熊坤;叢延廣;;革蘭陰性菌基因敲除載體的構(gòu)建及其應(yīng)用[A];重慶微生物學(xué)會第九屆會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2009年

3 孟凡偉;;利用基因敲除研究小鼠Dapper2基因的功能[A];中國遺傳學(xué)會模式生物與人類健康研討會會議論文集[C];2010年

4 黃黎珍;顧為望;;利用體細(xì)胞核移植技術(shù)生產(chǎn)基因敲除豬的研究[A];第九屆中國實驗動物科學(xué)年會（2010新疆）論文集[C];2010年

5 隋聰;熊承良;沈士亮;;敲除Attractin或Mahoganoid基因?qū)π坌孕∈笊硟?nèi)分泌激素的影響[A];湘鄂贛首屆性與生殖健康學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2007年

6 師福山;趙德明;;朊蛋白受體基因敲除的打靶載體構(gòu)建[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會2010年學(xué)術(shù)年會——第二屆中國獸醫(yī)臨床大會論文集(上冊)[C];2010年

7 李志杰;丁壯;;基因敲除及其在動物疾病上的研究應(yīng)用[A];第六屆全國會員代表大學(xué)暨第11次學(xué)術(shù)研討會論文集（上）[C];2005年

8 周晴晴;閆紅霞;金戈;康巧珍;;蛋白4.1R基因敲除對小鼠T細(xì)胞的影響[A];第九屆中國實驗動物科學(xué)年會（2010新疆）論文集[C];2010年

9 林蜜蜜;尹芙蓉;金暢;瞿佳;;LGR4基因敲除成年鼠眼表型研究[A];中華醫(yī)學(xué)會第十二屆全國眼科學(xué)術(shù)大會論文匯編[C];2007年

10 路福平;田琳;;分枝桿菌甾酮C_(1,2)位脫氫酶的基因敲除[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

中國重要報紙全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 李e灞頸ㄊ迪凹?xì)J，

本文編號：260820