【摘要】： 研究背景與目的：甘露聚糖結(jié)合凝集素(mannan-binding lectin,MBL)，又稱甘露糖結(jié)合凝集素(mannose-binding lectin,MBL)，是一種鈣離子依賴的(C型)血清凝集素，在防御抵抗多種病原微生物的天然免疫中起著重要的作用，對6個(gè)月到2歲的嬰幼兒尤其重要。 MBL是一個(gè)由若干個(gè)相同的亞單位組成的寡聚體分子，每條肽鏈的C端是一凝集素結(jié)構(gòu)域(碳水化合物識別結(jié)構(gòu)域)，近N端是一膠原樣區(qū)。這兩個(gè)結(jié)構(gòu)區(qū)與MBL的生物學(xué)功能密切相關(guān)。其凝集素結(jié)構(gòu)域可以與某些特定的糖配體結(jié)合，尤其是與病原微生物表面的糖鏈結(jié)合后，可通過膠原樣區(qū)激活MBL相關(guān)絲氨酸蛋白酶，進(jìn)而激活補(bǔ)體系統(tǒng)，這條途徑稱為凝集素途徑。MBL也可直接與吞噬細(xì)胞表面的膠原凝素受體結(jié)合，，發(fā)揮調(diào)理吞噬功能或引起其它的免疫反應(yīng)。 正常情況下MBL的血清濃度很低，1.5mg/L左右，但在感染的早期可升高2-3倍。因基因突變而導(dǎo)致的MBL表達(dá)水平降低或結(jié)構(gòu)異常，與免疫功能處于不成熟階段的兒童對感染的易感性增強(qiáng)密切相關(guān)。 浙江大學(xué)碩土學(xué)位論文 本研究旨在用親和層析法分離純化出MBL分子，并測定其與單糖配體 以及與兒童臨床上常見細(xì)菌的結(jié)合活性，探討其在兒童天然免疫中的作用。 方法：將甘露聚糖與漠化氰活化的 SSph。Se 4B偶聯(lián)，制成親和柱基質(zhì)一 甘露聚糖Sopharose 4B。將羊血清或人血漿過親和柱，在鈣離子存在的條件 下，MBL分子可與柱上的甘露聚糖結(jié)合。用EDTA通過螫合鈣離子，從親和 柱上洗脫MBL，從而分離純化出MBL。用還原性10％SDS－PAGE測定羊及 人MBL分子單體的分子量。羊血清MBL經(jīng)膠原酶消化后，將其產(chǎn)物行還原 性 10％SDS－PAGE，觀察 MBL分子量的變化。用酶聯(lián)凝集素試驗(yàn)測定羊血清 MBL與單糖配體及與常見細(xì)菌的結(jié)合活性。 結(jié)果：①M(fèi)BL的分離純化：羊血清與人血漿分別經(jīng)親和層析后，得到純化的 MBL分子。在還原條件下行SDS－PAGE，羊血清MBL在29kD和 33kD及更高分子量處有蛋白質(zhì)條帶；人血漿N舊L在30kD及90 kDkD 處有蛋白質(zhì)條帶； ②MBL分子膠原樣結(jié)構(gòu)的鑒定：羊血清MBL分子被膠原酶消化后， 在還原性SDS－PAGE上顯示22．4kD及ZI．6kD處有蛋白質(zhì)條帶； ③羊血清MBL與單糖配體的結(jié)合活性：羊血清MBL分子對各單糖配 體的結(jié)合有一定的選擇性，從大到小依次為：N乙酞氨基葡萄糖＞卜 巖藻糖＞＊－氨基葡萄糖＞N－乙酚氨基半乳糖； ④羊血清MBL與常見細(xì)菌的結(jié)合活性：羊血清MBL對不同的細(xì)菌有 不同的結(jié)合力：對解鳥氨酸克雷伯氏菌、大腸埃希氏菌有很強(qiáng)的結(jié) 合力；對溶血性葡萄球菌、陰溝腸桿菌、表皮葡萄球菌的結(jié)合力相 對較弱；對肺炎克雷伯氏菌、流感嗜血桿菌、金黃色葡萄球菌的不 同菌株結(jié)合力差異較大。 結(jié)論：用甘露聚糖石Cpharose 4B親和柱行親和層析能從哺乳動(dòng)物血清（血 ．2． 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 漿）中分離純化出有活性的MBL分子，人血漿MBL單體的分子量是30kD， 羊血清MBL單體有兩種，分子量分別為29kD和33kD。羊血清MBL分子與 其它哺乳動(dòng)物的MBL分子一樣，也具有膠原樣結(jié)構(gòu)域。羊血清MBL對各種 單糖的結(jié)合有不同的選擇性，其選擇性與人血漿MBL類似。羊血清MBL 對不同的細(xì)菌有不同的結(jié)合力，對革蘭氏陰性菌的結(jié)合力相對較陽性菌強(qiáng)。
【圖文】：

2.2MBL分子膠原樣結(jié)構(gòu)的鑒定羊血清MBL在37℃與Vn型膠原酶孵育24小時(shí)后，行還原性10%SDS一PAGE，結(jié)果如圖3所示。在第1泳道可見膠原酶在12OkD及111kD處有蛋白質(zhì)條帶顯示。在第3泳道可見經(jīng)膠原酶消化后的蛋白質(zhì)在22.4kD、21.6kD低分子量處有條帶顯示。
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R341

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 陳政良,韓強(qiáng)濤,易正山,張麗蕓,盧曉,彭良平;人血漿MBL的分離純化及其特性鑒定[J];免疫學(xué)雜志;1998年01期

本文編號：2603496