本文關(guān)鍵詞：自然沉降速度法分選兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景：在前期研究低滲結(jié)合自然沉降分選兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的基礎(chǔ)上,以工程學(xué)關(guān)于顆粒流體力學(xué)為指導(dǎo),求出兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)液中的沉降速度。通過自然沉降速度法分選及鑒定細(xì)胞,建立一個簡單易行的分離、純化、增殖間充質(zhì)干細(xì)胞的方法。目的：探討自然沉降速度法分選骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的可行性。方法：密度梯度離心法確定兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的密度區(qū)間(ρ1),掃描電鏡測量出兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的直徑(d),液體密度計測算出培養(yǎng)液的密度(ρ2),黏度計測算出培養(yǎng)液的黏度(μ),選擇合適的公式計算出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的沉降速度Vt。以此沉降速度從兔的骨髓細(xì)胞中分選兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,體外培養(yǎng)并觀察其增殖能力、細(xì)胞純度、細(xì)胞分化潛能,同時測定兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞克隆集落形成率的,記錄各組原代培養(yǎng)時間,通過統(tǒng)計學(xué)比較各組間的差異。結(jié)果：1、運(yùn)用密度梯度離心法獲得的貼壁生長的間充質(zhì)干細(xì)胞細(xì)胞,細(xì)胞呈長梭形、魚群狀排列生長。第三代間充質(zhì)干細(xì)胞經(jīng)成骨誘導(dǎo),21天后,VonKossa染色見黑色鈣結(jié)節(jié),AKP染色見呈紫藍(lán)色的堿性磷酸酶及棕褐色或咖啡色顆粒,對照組兩種染色均陰性；成脂誘導(dǎo)后21天Red oil染色見淡藍(lán)色細(xì)胞核及橙紅色脂滴,對照組染色陰性。電鏡掃描細(xì)胞示直徑為20.37±4.58 μm (17μm-28μm),推導(dǎo)出自然沉降速度為Vt=50-55mm/h。2、通過自然沉降速度發(fā)分選獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞貼壁生長,呈長梭形、魚群狀排列生長。細(xì)胞形態(tài)與梯度密度離心法獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞相似。3、較之梯度密度離心法,自然沉降速度法分選的間充質(zhì)干細(xì)胞生長曲線顯示更強(qiáng)的增殖活力。細(xì)胞生長集落形成率：1.067g/ml組比1.070g/ml組比自然沉降速度法組為5.33±1.07比5.56±0.88比6.11±1.17(P=0.000)。原代細(xì)胞培養(yǎng)時間：1.067g/ml組比1.070g/m1組比自然沉降速度法組為14.93±1.20比14.89±0.91比7.64±0.82(P0.01)。4、與梯度密度離心法相似,自然沉降速度法分選獲得的間充質(zhì)干細(xì)胞成骨誘導(dǎo)21天后Von Kossa染色見黑色鈣結(jié)節(jié),AKP染色見呈紫藍(lán)色的堿性磷酸酶及棕褐色或咖啡色顆粒,成脂誘導(dǎo)21天后Red oil染色見淡藍(lán)色細(xì)胞核及橙紅色脂滴。對照組染色均陰性。結(jié)論：1、通過電鏡測量得出兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的直徑約為d=(20.37±4.58) μm.進(jìn)一步確定兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在培養(yǎng)液中的沉降速度Vt=50-55mm/h。2、通過自然速度沉降法可成功從兔骨髓組織中分選出骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,分選出的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞原代培養(yǎng)呈成纖維樣集落生長,經(jīng)特定的誘導(dǎo)后具有成骨、成脂的分化潛能。3、較密度梯度離心法,自然速度沉降法分離出的間充質(zhì)干細(xì)胞具有原代培養(yǎng)時間短,細(xì)胞集落形成率高的特點(diǎn)。4、自然速度沉降法在間充質(zhì)干細(xì)胞分選過程中不采取任何干預(yù)措施,也不添加任何分離介質(zhì),僅通過物理原理自然沉降,可能對細(xì)胞損傷小,可能使細(xì)胞原有的生物學(xué)特性得到保留。
【關(guān)鍵詞】：骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞 原代細(xì)胞 沉降速度 細(xì)胞分選
【學(xué)位授予單位】：廣西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 個人簡歷3-5
• 摘要5-7
• ABSTRACT7-10
• 前言10-12
• 第一部分：兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞沉降速度的確定12-31
• 引言12-13
• 材料與方法13-19
• 1 動物和材料13-14
• 2 實(shí)驗(yàn)方法14-19
• 結(jié)果19-24
• 討論24-28
• 結(jié)論28-29
• 參考文獻(xiàn)29-31
• 第二部分：自然沉降法分離間充質(zhì)干細(xì)胞31-55
• 引言31-33
• 材料和方法33-39
• 1 材料和試劑33
• 2 實(shí)驗(yàn)方法33-39
• 結(jié)果39-48
• 討論48-51
• 結(jié)論51-52
• 參考文獻(xiàn)52-55
• 附錄55-56
• 第三部分 ：論文綜述56-73
• 參考文獻(xiàn)67-73
• 致謝73-74
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文74-86

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 舒賽男;魏來;方峰;王宇;;免疫磁珠分選系統(tǒng)在分離大鼠骨髓干細(xì)胞群中的應(yīng)用[J];標(biāo)記免疫分析與臨床;2006年01期

2 張宏偉,鄭玉梅;免疫磁珠性質(zhì)及其應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊);2000年01期

3 高秦;劉宏偉;金巖;;免疫磁珠法分離純化人牙周膜干細(xì)胞[J];臨床口腔醫(yī)學(xué)雜志;2006年09期

4 牛微;楊f

本文編號：259976