本文關(guān)鍵詞：乳腺癌細(xì)胞移植瘤模型的建立及小動(dòng)物超聲和活體熒光成像中的應(yīng)用比較，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乳腺癌是女性常見的一種高度異質(zhì)性的惡性腫瘤，我國(guó)目前乳腺癌發(fā)病率正以每年2%-3%的速度增長(zhǎng)。乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231屬于三陰性乳腺癌，是Basal B亞型的一種，細(xì)胞來(lái)源于胸水，為轉(zhuǎn)移型腺癌。由于其高侵襲和高轉(zhuǎn)移特性，是目前乳腺癌中預(yù)后最差的一種亞型。 裸鼠出現(xiàn)于1966年，編碼叉頭蛋白家族的一種轉(zhuǎn)錄因子FoxN1和fork-head box N1，這兩個(gè)基因發(fā)生突變生成裸鼠。FoxN1在嚙齒類和人類中，其序列和功能是高度保守的。在小鼠、大鼠和人體中，F(xiàn)oxN1突變可導(dǎo)致胸腺先天發(fā)育不全和無(wú)毛皮膚。在人體中，F(xiàn)oxN1突變可引起人類脫發(fā)和指甲營(yíng)養(yǎng)不良，并導(dǎo)致初級(jí)T-細(xì)胞缺乏癥相關(guān)的嚴(yán)重感染。而FoxN1突變小鼠的結(jié)果是生成裸鼠，裸鼠由于其T細(xì)胞發(fā)育免疫缺陷和毛囊發(fā)育功能衰竭,已經(jīng)作為一個(gè)模型被廣泛應(yīng)用于實(shí)驗(yàn)?zāi)[瘤、免疫學(xué)和移植研究。 小動(dòng)物超聲和活體熒光成像是現(xiàn)代動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的兩種實(shí)驗(yàn)方法，相較于病理切片分析需要處死實(shí)驗(yàn)動(dòng)物來(lái)檢測(cè)具體的實(shí)驗(yàn)進(jìn)程，前兩種實(shí)驗(yàn)技術(shù)可以在無(wú)創(chuàng)傷的情況下，對(duì)動(dòng)物模型的發(fā)生發(fā)展進(jìn)行檢測(cè)，同時(shí)由于實(shí)驗(yàn)前后一直使用同一只或同一批小鼠，，能減小個(gè)體差異，從而減小實(shí)驗(yàn)誤差。但是這兩種實(shí)驗(yàn)手段也有區(qū)別，比如小動(dòng)物超聲可以通過運(yùn)用不同頻率的探頭來(lái)檢測(cè)動(dòng)物不同的器官，而活體熒光成像卻不能定位，但是活體熒光成像可以直觀的觀察到熒光表達(dá)部位，無(wú)需一步步排查。 本研究將表達(dá)GFP的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231移植到裸鼠體內(nèi)，成功建立乳腺癌移植瘤模型，利用小動(dòng)物超聲成像和活體熒光成像監(jiān)測(cè)移植瘤的發(fā)生、發(fā)展過程，比較在此過程中小動(dòng)物超聲成像和活體熒光成像的不同作用。 目的： 1．建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型。 2．觀察小動(dòng)物超聲成像在乳腺癌移植瘤研究中的作用。 3．觀察活體熒光成像在乳腺癌移植瘤研究中的作用。 方法： 1．將穩(wěn)定表達(dá)GFP的乳腺癌細(xì)胞MDA-MB-231接種于裸鼠右側(cè)乳腺處，建立乳腺癌裸鼠移植瘤模型。 2．用0.1g/ml的戊巴比妥鈉麻醉裸鼠，用小動(dòng)物超聲成像監(jiān)測(cè)乳腺癌裸鼠移植瘤的發(fā)生發(fā)展過程。 3．用0.1g/ml的戊巴比妥鈉麻醉裸鼠，用小動(dòng)物活體熒光成像監(jiān)測(cè)乳腺癌裸鼠移植瘤的發(fā)生發(fā)展過程。 4．腫瘤第28天處死裸鼠，取裸鼠的移植瘤做切片HE染色。 結(jié)果： 1．成功構(gòu)建乳腺癌裸鼠移植瘤模型。 2．HE染色結(jié)果： 移植瘤為間葉性瘤，多有纖維細(xì)胞組成，所含的癌細(xì)胞相對(duì)較少，癌細(xì)胞形狀不規(guī)則、有分裂相、核大且染色較深、核質(zhì)較大，呈現(xiàn)分化程度較低特征，可見有小血管形成。 3．小動(dòng)物超聲成像監(jiān)測(cè)乳腺癌移植瘤的發(fā)生發(fā)展過程： （1）在種瘤的第3天未檢測(cè)到腫瘤影像。 （2）在種瘤的第7天右側(cè)胸部淺表軟組織超聲可見不均質(zhì)實(shí)質(zhì)性略低回聲，面積為2.37mm2，長(zhǎng)徑為2.44mm，短徑為0.28mm，其邊界欠清晰。 （3）在種瘤的第14天右側(cè)胸部淺表軟組織超聲可見增大的不均質(zhì)實(shí)質(zhì)性略低回聲，面積為6.62mm2，長(zhǎng)徑為3.68mm，短徑為1.66mm，其內(nèi)有點(diǎn)狀分布的高回聲，邊界欠清晰。 （4）在種瘤的第21天右側(cè)胸部淺表軟組織超聲可見明顯增大的實(shí)質(zhì)性較低回聲，面積為21.99mm2，長(zhǎng)徑為7.59mm，短徑為3.33mm，其邊界不清，其內(nèi)靠近瘤體表面可見大片狀高回聲。 （5）在種瘤的第28天右側(cè)胸部淺表軟組織超聲可見明顯突出于胸部的較大實(shí)質(zhì)性低回聲，面積為52.00mm2，長(zhǎng)徑為9.28mm，短徑為8.06mm，其邊界不清，其內(nèi)靠近瘤體表面可見片狀高回聲區(qū)范圍明顯增大。 4．活體熒光成像在種瘤當(dāng)天，即0天即可觀察到GFP的表達(dá)，但是第7天時(shí)未檢查到熒光的表達(dá)，第14天熒光高強(qiáng)度表達(dá)，且隨時(shí)間逐漸增強(qiáng)。 結(jié)論： 1．成功構(gòu)建乳腺癌裸鼠移植瘤模型。 2．活體熒光成像在監(jiān)測(cè)移植瘤發(fā)生發(fā)展較早期具有較高的靈敏度。 3．小動(dòng)物超聲在監(jiān)測(cè)移植瘤發(fā)生發(fā)展過程中、晚期，具有較高的靈敏度及準(zhǔn)確性，并且在操作上更簡(jiǎn)單、方便。 4．相對(duì)于病理分析,小動(dòng)物超聲以其實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)的優(yōu)勢(shì),保證活體動(dòng)物實(shí)驗(yàn)的連續(xù)性及一致性,可降低實(shí)驗(yàn)誤差,顯示其獨(dú)道的動(dòng)物實(shí)驗(yàn)優(yōu)勢(shì)。
【關(guān)鍵詞】：乳腺癌 移植瘤模型 小動(dòng)物超聲 活體熒光成像
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R445.1;R737.9;R-332
【目錄】：

• 中文摘要4-8
• Abstract8-13
• 目錄13-15
• 英文縮寫詞表15-16
• 第1篇 緒論16-25
• 1.1 裸鼠移植瘤模型16-18
• 1.2 小動(dòng)物超聲成像18-21
• 1.3 活體熒光成像21-25
• 第2篇 實(shí)驗(yàn)研究25-50
• 實(shí)驗(yàn)一 裸鼠乳腺癌移植瘤模型的建立25-34
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料25-27
• 1.1.1 主要試劑25
• 1.1.2 主要儀器設(shè)備25-26
• 1.1.3 主要試劑配制26-27
• 1.1.4 細(xì)胞株27
• 1.1.5 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物27
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法27-29
• 1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)27-28
• 1.2.2 乳腺癌移植瘤模型的建立28
• 1.2.3 HE 染色28-29
• 1.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果29-31
• 1.3.1 成功建立裸鼠移植瘤模型29
• 1.3.2 第 28 天的乳腺癌細(xì)胞移植瘤 HE 染色29-31
• 討論31-33
• 小結(jié)33-34
• 實(shí)驗(yàn)二 小動(dòng)物超聲和活體熒光成像在乳腺癌移植瘤模型中的應(yīng)用比較34-50
• 2.1 實(shí)驗(yàn)材料34
• 2.1.1 主要試劑34
• 2.1.2 主要儀器設(shè)備34
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法34-35
• 2.2.1 小動(dòng)物超聲圖像的采集34-35
• 2.2.2 活體熒光圖像的采集35
• 2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果35-45
• 2.3.1 乳腺癌細(xì)胞移植 3 天時(shí)的小動(dòng)物超聲圖像35-36
• 2.3.2 乳腺癌細(xì)胞移植 7 天時(shí)的小動(dòng)物超聲圖像36-37
• 2.3.3 乳腺癌細(xì)胞移植 14 天時(shí)的小動(dòng)物超聲圖像37
• 2.3.4 乳腺癌細(xì)胞移植 21 天時(shí)的小動(dòng)物超聲圖像37-38
• 2.3.5 乳腺癌細(xì)胞移植 28 天時(shí)的小動(dòng)物超聲圖像38-39
• 2.3.6 精確 GFP 的激發(fā)光和吸收光波長(zhǎng)39
• 2.3.7 乳腺癌細(xì)胞移植 0 天時(shí)的活體熒光圖像39-40
• 2.3.8 乳腺癌細(xì)胞移植 3 天時(shí)的活體熒光圖像40-41
• 2.3.9 乳腺癌細(xì)胞移植 7 天時(shí)的活體熒光圖像41
• 2.3.10 乳腺癌細(xì)胞移植 14 天時(shí)的活體熒光圖像41-42
• 2.3.11 乳腺癌細(xì)胞移植 21 天時(shí)的活體熒光圖像42-43
• 2.3.12 乳腺癌細(xì)胞移植 28 天時(shí)的活體熒光圖像43
• 2.3.13 裸鼠模型移植瘤和主要臟器的熒光圖像43-45
• 討論45-49
• 小結(jié)49-50
• 第3篇結(jié)論50-51
• 參考文獻(xiàn)51-56
• 作者簡(jiǎn)介及在學(xué)期間所取得的科研成果56-57
• 致謝57

【參考文獻(xiàn)】

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  本文關(guān)鍵詞：乳腺癌細(xì)胞移植瘤模型的建立及小動(dòng)物超聲和活體熒光成像中的應(yīng)用比較，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：259886