【摘要】： 幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)是慢性胃炎、消化性潰瘍和胃MALT淋巴瘤的病原體，也與胃癌發(fā)病密切相關(guān)。人群中幾乎有一半終身感染Hp，但只有部分感染者發(fā)展為明顯的臨床疾病，其中部分原因可能與Hp的致病力不同有關(guān)。 Hp空泡毒素基因(vacuolating cytotoxin gene A，vacA)的產(chǎn)物(VacA)能使上皮細胞產(chǎn)生空泡變性；細胞毒素相關(guān)蛋白基因(cytotoxin-associated gene A，cagA)的產(chǎn)物(CagA)被Hp排泌入胃上皮細胞后會導(dǎo)致細胞骨架的重排，刺激胃上皮細胞產(chǎn)生炎細胞因子IL-8等，兩者均為該菌重要的致病因子。 所有Hp菌株均含vacA基因，但只有50％左右菌株發(fā)現(xiàn)有空泡毒活性，而空泡毒活性與vacA基因型有關(guān)。一般認為，vacA基因含有信號區(qū)(s區(qū))和中間區(qū)(m區(qū))兩個主要的可變區(qū)，s區(qū)存在s1a、s1b或s2亞型，而m區(qū)存在m1或m2亞型，s1/m1型毒素活性最強，s1/m2型毒素活性中等或偏弱，s2/m2型毒素活性極弱或無，進一步的研究也已發(fā)現(xiàn)了一些別的s區(qū)和m區(qū)亞型變異體(s1c、m1a、m1b、m1b-m2等)。 歐美國家分離的Hp菌株中約60～70％具有cagA基因，并發(fā)現(xiàn)感染cagA陽性和/或vacA s1/m1型菌株可能更易導(dǎo)致消化性潰瘍的發(fā)生。韓國、日本 浙江人學(xué)顧1一學(xué)位論義 中又流多 等部分亞洲國家分離的Hp菌株中90％以上攜帶cagA基因，主要的vacA 基因型也有別于歐美國家，而且不同cagA基因狀態(tài)和／或vacA基因型的菌 株在消化性潰瘍和慢性胃病中的分布無顯著性差異。 cagA和 vacA均為單拷貝基因，同一 HP菌株只有攜帶或不攜帶 cagA 基因兩種情況，vacA的s區(qū)或m區(qū)各亞型不可能同時出現(xiàn)于同一Hp菌株 中，因而多種cagA攜帶狀態(tài)和／或vacA亞型的存在表明其來源于不同Hp 菌株。近年國外文獻己有報道，同一病人可感染多株不同cagA狀態(tài)和／或 vacA基因型的Hp，且此類混合感染與消化性潰瘍的發(fā)生密切相關(guān)，但國內(nèi) 類似研究幾乎沒有。 因此，了解浙江地區(qū)患者單株式多株Hp感染、不同cagA狀態(tài)和／或vacA 基因型的Hp菌株在消化性潰瘍和慢性胃炎中的分布，對于明確本地區(qū)Hp 的致病機制、流行特點、感染來源等均有一定意義。 目的：了解浙江地區(qū)消化性潰瘍和慢性胃炎患者分離的 Hp臨床菌株的 cagA基因狀態(tài)和 vacA基因型（agA個acA優(yōu)勢基因型的分布情況以及是否 存在不同基因型多株Hp混合感染現(xiàn)象。分析cagA基因和／或vacA基因 型、不同基因型Hp混合感染與胃病的關(guān)系。 方法：選擇胃竇、胃體雙份活檢標本均培養(yǎng)出Hp的42例慢性胃炎（CG） 和 36例消化性潰瘍（PU）患者作為研究對象，采用聚合酶鏈反應(yīng)（PCR） 檢測分離的 156份 Hp菌株 cagA基因、vacA基因的信號區(qū)＊）和中間區(qū) （m）亞型，分析 Hp基因型及多株Hp混合感染在 CG和 PU中的分布。 部分優(yōu)勢基因型的擴增產(chǎn)物TA克隆后進行核苦酸序列測定。 結(jié)果：96．2％的分離自病人胃竇標本的 Hp菌株 （7廠8）cagA陽性， 97．4％的十應(yīng)胃體標本中分離的Hp菌株（76／78）為cagA陽性，有1例（1．3％） 患者胃竇、胃體存在cagA狀態(tài)不一的兩株Hp混合感染。78例患者胃竇標 本分離的Hp菌株vacA基因分型中，sla／ml、slajmZ、sla／mlb、Sla／mlb－SZ 4種 vacA基因型菌株所占比例分另為 6．40（5／78）、55．lO（43／78）、26．9o ～2～ 浙江大學(xué)碩士學(xué)位論文 中又視要 （ZI／78）和 1．3O（l／78），混合感染率為3．80（3／78）。而相應(yīng)的胃體標本 中，前述四種vacA基因型菌株所占比例依次為6．4％（5／78）、53．8％（42／78）、 25石％（20／78）和 3．8％（／78），混合感染率為 5．l％（4／78）。cagA十一slajmZ 和 cagA”－sla／mlb在胃竇標本分離的 Hp菌株中占引．3％（40／78）和 26．9％ 門1／78），而在相應(yīng)的胃體標本來源的菌株中占5二．6％（41／78）和25．6％ u0門8人少數(shù)Hp菌株vacA基因的 s區(qū)和 m區(qū)不能分型，未發(fā)現(xiàn)sib、sZ 和 mla型。綜合分離自胃竇、胃體標本的 Hp菌株基因型分析結(jié)果，20．5％ （ 6廠8）患者標本中檢出不同基因型的多株 Hp菌株，同一胃內(nèi)多部位采 樣比單部位采樣者有更高的混合感染檢出率。Hp cagA基因、vacA基因型、 cagA八acA基因組合及不同基因型菌株混合感染在CG和 PU中的分布差異 均無顯著性0＞0刀5人6株sla型Hp菌株的s區(qū)擴增產(chǎn)物與報道的sla型 60 90株核著酸序列同源性為 93，15－94．86％，4株 mZ型 Hp菌株的 m區(qū)擴 增產(chǎn)物與報道的mZ型87－203株核著酸序列之間同源性為93．63～97石1％。 結(jié)論：cagA＼sl a／mZ是浙江地區(qū)慢性胃炎或消化性潰瘍中最主要的 HP 菌株的優(yōu)勢基因型，其次為 cagA＼sl a／m fo，部分菌株 vacA sla型和 mZ型 擴增片段的核著酸序列與國外文獻報道參考菌株的序列有很高的同源性， 部分患者可同時感染不同C明A攜帶狀態(tài)和／或不同VSCA基因型的多株Hp。 但cagA攜帶狀態(tài)、各種vacA基因型、不同基因型混合感染的Hp菌株， 在 CG和 PU中的分布無顯著性差異。
【圖文】：

cagA)編碼的CagA蛋白為該菌重要的致病因子18一川。vaeA基因為全長約3864一38ssbp的單拷貝基因l‘2一，3]，含有信號區(qū)(S區(qū))和中間區(qū)(m區(qū))兩個主要的可變區(qū)(基因結(jié)構(gòu)見圖1)。vacA基因編碼的空泡毒素能使上皮細胞產(chǎn)生空泡變性。vacA基因存在于所有Hp菌株中l(wèi)‘2一，“l(fā)，但只有約50%菌株表達vacA蛋白[”]，其表達產(chǎn)量也有差異，這與vacA基因型的不同有關(guān)l8]。Aiherton等發(fā)現(xiàn)不同Hp菌株vacA基因序列差異主要位于S區(qū)和m區(qū)，并發(fā)現(xiàn)s區(qū)可分為sla、Slb和s2，m區(qū)可分為ml和mZ，如此vaeA基因可形成51a/ml、51ajmZ、5lb/ml、5lb/m2、52/mZ多個基因型[81，自然發(fā)生的SZzmx也已發(fā)現(xiàn)[

在微需氧環(huán)境下(氣體成分為85%NZ、10%CO:和5%02)培養(yǎng)3一5天后，平板上菌落大小適中，，刮取菌落涂片革蘭氏染色后鏡檢，形態(tài)典型(如彎曲狀、海鷗狀等)，見圖4。刮取生長良好的Hp混懸于含30%滅菌甘油布氏肉湯的Eppendorf管內(nèi)，保存于一70’C冰箱中，6個月后復(fù)蘇成功率達85%以上。~25~
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2003
【分類號】：R378

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本文編號：2593583