【摘要】：目的:通過(guò)檢測(cè)端粒酶活性(TMA)在原代大鼠邊緣群及非邊緣群肝細(xì)胞中表達(dá)差異,探討邊緣群細(xì)胞是否具有肝臟干細(xì)胞的部分特征.方法:原位兩步膠原酶法分離大鼠肝細(xì)胞.應(yīng)用流式熒光激活細(xì)胞分選術(shù)(FACS)將肝細(xì)胞分成邊緣群(SP)及非邊緣群(Non-SP),并定量分析兩群細(xì)胞中TMA水平.結(jié)果:存在SP細(xì)胞并占細(xì)胞總體2.1%,SP細(xì)胞TMA高于Non-SP細(xì)胞(28.1±1.3vs2.0±0.2TPG,P0.01).結(jié)論:大鼠邊緣群肝細(xì)胞具有更強(qiáng)的自我更新能力,即具有干細(xì)胞的部分特征.
【圖文】：

角(P3)另有小部分散點(diǎn)聚集(低Hoechst),而維拉帕米拮抗組無(wú)此區(qū)域,即SP細(xì)胞. SP占受檢細(xì)胞的(2. 1±0. 2)% (圖1).2.3　SP細(xì)胞及Non2SP細(xì)胞TMA檢測(cè)　①定量檢測(cè): SP細(xì)胞TMA為(28. 1±1. 3) TPG,Non2SP細(xì)胞TMA為(2. 0±0. 2) TPG. SP細(xì)胞TMA水平顯著高于Non2SP細(xì)胞(t=50. 440,P<0. 01).②聚丙烯酰胺凝膠電泳: SP細(xì)胞電泳呈陽(yáng)性,Non2SP細(xì)胞電泳呈陰性(圖2).A:無(wú)維拉帕米組; B:加入維拉帕米組.圖1　流式細(xì)胞儀二維散點(diǎn)圖1: 1000個(gè)端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞對(duì)照; 2: SP細(xì)胞; 3: SP細(xì)胞熱失活處理;4: Non-SP細(xì)胞; 5:端粒酶陰性對(duì)照.圖2　SP及Non-SP細(xì)胞PCR產(chǎn)物聚丙烯酰胺凝膠電泳3　討論干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞,多種干細(xì)胞均表現(xiàn)出較強(qiáng)的端粒酶活性[2],而端粒酶對(duì)于維持干細(xì)胞的自我更新、多向分化潛能以及抗衰老均有重要意義[3].近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),一些細(xì)胞對(duì)DNA結(jié)合染料Hoechst33342有特異性排出,結(jié)合FACS分析

于Non2SP細(xì)胞(t=50. 440,P<0. 01).②聚丙烯酰胺凝膠電泳: SP細(xì)胞電泳呈陽(yáng)性,Non2SP細(xì)胞電泳呈陰性(圖2).A:無(wú)維拉帕米組; B:加入維拉帕米組.圖1　流式細(xì)胞儀二維散點(diǎn)圖1: 1000個(gè)端粒酶陽(yáng)性細(xì)胞對(duì)照; 2: SP細(xì)胞; 3: SP細(xì)胞熱失活處理;4: Non-SP細(xì)胞; 5:端粒酶陰性對(duì)照.圖2　SP及Non-SP細(xì)胞PCR產(chǎn)物聚丙烯酰胺凝膠電泳3　討論干細(xì)胞是一類(lèi)具有自我更新和多向分化潛能的細(xì)胞,多種干細(xì)胞均表現(xiàn)出較強(qiáng)的端粒酶活性[2],而端粒酶對(duì)于維持干細(xì)胞的自我更新、多向分化潛能以及抗衰老均有重要意義[3].近年來(lái)研究發(fā)現(xiàn),一些細(xì)胞對(duì)DNA結(jié)合染料Hoechst33342有特異性排出,結(jié)合FACS分析,可得到低熒光并表現(xiàn)為邊緣性聚集的SP細(xì)胞,這已成為一種經(jīng)典的分離造血干/祖細(xì)胞的方法[4-5],并在小鼠肺、皮膚、骨骼肌、乳腺、胰島細(xì)胞及人類(lèi)皮膚、角膜等組織的干細(xì)胞的分離中被成功應(yīng)1022第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào)(J FourthMilMedUniv)2007

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