【摘要】： 研究背景: 妊娠至今依然是困惑免疫學(xué)家的未解之謎。胚胎作為半同種移植物不被母體免疫系統(tǒng)排斥,受多種因素影響,其中子宮內(nèi)膜局部免疫因素起著重要的調(diào)節(jié)作用。研究發(fā)現(xiàn)在滋養(yǎng)層細(xì)胞侵入點(diǎn)有許多免疫細(xì)胞圍繞其周?chē)?然而,盡管它們有著潛在的細(xì)胞毒作用,但在正常妊娠時(shí)并沒(méi)有造成對(duì)滋養(yǎng)細(xì)胞的殺傷。人們通過(guò)對(duì)蛻膜內(nèi)NK細(xì)胞的性狀研究,發(fā)現(xiàn)其明顯不同于外周血NK細(xì)胞,是一群獨(dú)特型的淋巴細(xì)胞群,因此將蛻膜中NK細(xì)胞命名蛻膜NK細(xì)胞,簡(jiǎn)稱(chēng)dNK細(xì)胞。dNK細(xì)胞從子宮內(nèi)膜分泌期開(kāi)始增加并于孕早期達(dá)到高峰(約占蛻膜淋巴細(xì)胞70%左右),且與絨毛外細(xì)胞滋養(yǎng)細(xì)胞緊密接觸,此后隨著妊娠的發(fā)展又逐漸下降,到晚孕時(shí)占蛻膜淋巴細(xì)胞35%左右。dNK細(xì)胞在整個(gè)妊娠期間的動(dòng)態(tài)變化過(guò)程提示其可能在受精卵的種植過(guò)程和胎盤(pán)生長(zhǎng)發(fā)育中起重要作用。近年來(lái)關(guān)于dNK細(xì)胞的來(lái)源、表型、功能及其與滋養(yǎng)細(xì)胞的相互識(shí)別關(guān)系已成為生殖免疫研究的熱點(diǎn)之一。 dNK細(xì)胞主要分布于母體與胚胎接觸的蛻膜,是母體直接識(shí)別胎兒抗原的免疫細(xì)胞,它的獨(dú)特的表型及功能不但能維持母胎界面的免疫耐受,還能分泌一系列細(xì)胞因子促進(jìn)蛻膜血管重建及Th1/ Th2平衡網(wǎng)絡(luò)的維持。若dNK細(xì)胞的數(shù)量及功能失調(diào)則可能誘發(fā)病理妊娠。研究蛻膜組織中NK細(xì)胞的功能狀態(tài)與妊娠的關(guān)系,無(wú)疑從一個(gè)全新的角度詮釋妊娠這一生理現(xiàn)象,也為揭示病理性妊娠的發(fā)生機(jī)制及最終有效防治提供新思路,并為生殖免疫的發(fā)展提供了新的理論依據(jù)。 目的: 檢測(cè)蛻膜中NK細(xì)胞(dNK細(xì)胞)的分布狀態(tài),以及其與外周血中NK細(xì)胞(pNK細(xì)胞)在含量、表型、Th1/Th2型細(xì)胞因子表達(dá)、殺傷功能方面的變化,探討蛻膜NK細(xì)胞獨(dú)特的表型、功能及其與滋養(yǎng)細(xì)胞的相互識(shí)別關(guān)系與母胎界面免疫耐受之間的重要聯(lián)系。 方法: 1)收取正常晚孕胎膜組織(6例),免疫組織化學(xué)法檢測(cè)蛻膜中NK細(xì)胞的分布狀態(tài)。 2)收集晚孕蛻膜組織及同一孕婦外周血(20例),機(jī)械研磨法聯(lián)合密度梯度離心法分離出蛻膜單個(gè)核細(xì)胞,單純密度梯度離心法分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)晚孕蛻膜、外周血中NK細(xì)胞的含量及表面CD16, CD69, NKG2A和NKG2D的表達(dá)變化。 3)收集晚孕胎盤(pán)組織8例,RT-PCR技術(shù)檢測(cè)胎盤(pán)滋養(yǎng)層中NKG2A的配體HLA-G, HLA-E和NKG2D的配體MICA mRNA的表達(dá)情況。 4)流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)晚孕蛻膜及外周血中NK細(xì)胞內(nèi)Th1/Th2型細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的表達(dá)。 5)免疫磁珠分選出蛻膜及外周血中NK細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)其分離純度,51Cr釋放法分別測(cè)定不同效靶比NK細(xì)胞對(duì)其敏感性靶細(xì)胞K562的殺傷活性。 結(jié)果: 1)蛻膜中的NK細(xì)胞有著特殊的分布狀態(tài),多數(shù)集中在蛻膜與滋養(yǎng)層交界的母胎界面處。 2)相對(duì)于pNK細(xì)胞,dNK細(xì)胞是蛻膜中的主群體淋巴細(xì)胞。 3)相對(duì)于pNK細(xì)胞,dNK細(xì)胞表面低表達(dá)CD16分子,高表達(dá)CD69分子。 4) dNK細(xì)胞高表達(dá)NKG2受體家族NKG2A和NKG2D,但在滋養(yǎng)層中只檢測(cè)到NKG2A的配體HLA-G和HLA-E ,而未檢測(cè)到NKG2D的配體MICA。 5) dNK細(xì)胞內(nèi)Th1/ Th2型細(xì)胞因子IFN-γ和IL-4的表達(dá)均明顯高于pNK細(xì)胞。 6)不同效靶比dNK細(xì)胞對(duì)其敏感性靶細(xì)胞K562的殺傷活性明顯低于pNK細(xì)胞。 結(jié)論: 蛻膜NK細(xì)胞作為重要的天然淋巴細(xì)胞,其含量、表型、Th1/Th2型細(xì)胞因子表達(dá)以及殺傷功能方面與外周血NK細(xì)胞有著明顯差異,并且其與滋養(yǎng)細(xì)胞之間有著密切聯(lián)系。蛻膜NK細(xì)胞獨(dú)特的表型及功能在介導(dǎo)母胎界面免疫耐受中發(fā)揮了重要的作用。
【圖文】：

學(xué)染色標(biāo)記蛻膜中 NK 細(xì)胞的表達(dá)及分布狀況CD56單克隆抗體標(biāo)記蛻膜NK細(xì)胞，標(biāo)本選取的為晚孕胎羊膜、滋養(yǎng)層與蛻膜三層結(jié)構(gòu)，滋養(yǎng)層與蛻膜的交界處即蛻膜 NK 細(xì)胞主要分布在滋養(yǎng)層與蛻膜交界的母胎界面處（蛻膜中。400 倍放大后發(fā)現(xiàn) CD56 主要表達(dá)于細(xì)胞膜上，

式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)晚孕蛻膜及外周血中 NK 細(xì)胞的含量、表型變化膜及外周血中 NK 細(xì)胞分別占其淋巴細(xì)胞的百分含量式細(xì)胞術(shù)分別檢測(cè)晚孕蛻膜 NK 細(xì)胞（dNK）及外周血中 NK 細(xì)胞（巴細(xì)胞的百分比，結(jié)果發(fā)現(xiàn)晚孕蛻膜中 NK 細(xì)胞占蛻膜淋巴細(xì)胞的2±5.9%，，明顯高于外周血中 NK 細(xì)胞的比率(12.5±3.7%)。dNK 表面密度明顯高于 pNK 細(xì)胞，在流式圖上表現(xiàn)為熒光強(qiáng)度增強(qiáng)，如圖
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R392

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本文編號(hào)：2579512