【摘要】： 本研究旨在合成可降解的聚乙烯亞胺(PEI)作為基因載體,從而實(shí)現(xiàn)高效低毒的非病毒基因轉(zhuǎn)染。通過(guò)利用1,4-丁二醇二氯甲酸酯作為聯(lián)接劑與小分子量PEI(MW = 800)縮合,我們獲得了一種新的PEI衍生物(命名為PolyLinkB或簡(jiǎn)稱(chēng)為BLP)。在不同細(xì)胞系上將該聚合物載體用于兩個(gè)常用的報(bào)告基因---綠色熒光蛋白基因及熒光素酶基因的轉(zhuǎn)染時(shí),我們獲得了高于大分子PEI(MW = 25000)的基因轉(zhuǎn)染活性及相當(dāng)于小分子PEI (MW = 800)的低毒性。通過(guò)瓊脂糖凝膠電泳分析發(fā)現(xiàn),該連接產(chǎn)物在與DNA的比例為1:1(w/w)的條件下可以將DNA完全復(fù)合,并且形成平均粒徑為65nm左右的復(fù)合物顆粒,載體與DNA比例(質(zhì)量比)的進(jìn)一步增大(5,7,10)對(duì)復(fù)合物粒徑?jīng)]有顯著影響,同時(shí)復(fù)合物的Zeta電勢(shì)也在載體材料與DNA的質(zhì)量比超過(guò)1以后穩(wěn)定在20mV左右。 產(chǎn)物的紅外光譜和核磁共振表征分別顯示了氨酯結(jié)構(gòu)的羰基伸縮振動(dòng)(1698cm-1)及氨酯兩側(cè)α碳上的氫譜化學(xué)位移(δ=4,δ=2.5),確認(rèn)了產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)。然而以已知分子量的PEI作為標(biāo)準(zhǔn)物進(jìn)行GPC凝膠滲透色譜測(cè)試,顯示合成產(chǎn)物的分子量?jī)H為942.0924Da。這可能是由于交聯(lián)產(chǎn)物的結(jié)構(gòu)與PEI不同,導(dǎo)致分子量測(cè)試的誤差�；蛘呓Y(jié)構(gòu)的改變使小分子產(chǎn)物具有了轉(zhuǎn)染活性�？傊�,新的可降解PEI衍生物顯示了理想的基因
【圖文】：

圖 1-2 PEI 在體內(nèi)轉(zhuǎn)染的過(guò)程示意圖ure 1-2 The delivery of plasmid DNA with PEI gene carrier影響PEI/DNA復(fù)合物的轉(zhuǎn)染效果和細(xì)胞毒性。這的離子強(qiáng)度，zeta電勢(shì)和粒徑大小等。研究表明NA復(fù)合，有較好的轉(zhuǎn)染效果，，但相應(yīng)地，高分子Da）在鹽緩沖液和無(wú)鹽緩沖液中都比分支化的PEI在線形PEI組成的基因復(fù)合物在其有效治療濃度下命的副作用[15]。同時(shí)，由于PEI不具備生物降解者對(duì) PEI 進(jìn)行改造，在其分子基礎(chǔ)上開(kāi)發(fā)了各種針對(duì)近期國(guó)內(nèi)外 PEI 衍生物用作非病毒基因載體衍生物用作非病毒基因輸送載體的研究

BLP的紅外光譜圖
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R346;R318.08

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 李達(dá);王青青;余海;;基于聚乙烯亞胺為骨架的非病毒轉(zhuǎn)基因載體的構(gòu)建策略[J];國(guó)際腫瘤學(xué)雜志;2006年03期

2 葉樹(shù)楠,楊述華,楊操,吳強(qiáng),郜勇;腫瘤靶向DNA載體——轉(zhuǎn)鐵蛋白-多聚乙烯亞胺體外介導(dǎo)小鼠IL-12基因轉(zhuǎn)染小鼠骨肉瘤細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[J];中國(guó)骨腫瘤骨病;2004年03期

3 王青松,方曉玲;非病毒載體在腫瘤基因治療領(lǐng)域的研究進(jìn)展[J];藥物生物技術(shù);2005年02期

4 蔡佳;陳鈞;黃平;申云帆;蔣新國(guó);;PEG化聚乙烯亞胺作為非病毒基因給藥載體的研究[J];中國(guó)醫(yī)藥工業(yè)雜志;2006年11期

5 靳雪源,張玲霞,樓敏,謝建芳;肝靶向DNA載體乳糖化多聚乙烯基亞胺及體外轉(zhuǎn)染試驗(yàn)[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2001年04期

6 李達(dá);王青青;湯谷平;李經(jīng)忠;黃宏靚;沈芬平;余海;;含RGD肽CP9修飾的聚乙烯亞胺復(fù)合物的理化特性及其轉(zhuǎn)基因功能的研究[J];浙江大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年06期

本文編號(hào)：2577065