發(fā)布時間：2020-01-28 20:59

【摘要】： 目的:建立實驗性變應性腦脊髓炎(Experimental allergic encephalomyelitis, EAE)小鼠模型,流式細胞儀檢測實驗組小鼠脾臟CD4+ T和CD4+CD25+ T細胞數(shù)量的變化,來研究CD4+ T細胞和CD4+CD25+ Treg細胞在EAE發(fā)病機制中的作用,為進一步研究其發(fā)病機制及治療方法提供依據(jù)。 方法:用髓鞘堿性蛋白(Myelin basic protein, MBP)加福氏完全佐劑制備抗原佐劑乳化物,分別于0d、7d免疫誘導BALB/c小鼠。模型組分高劑量組與低劑量組。高劑量組每只0.2ml抗原佐劑乳化物,含400μg MBP、百日咳疫苗(Bacilus pertusis vaccine,BPV)0.1ml;低劑量組每只0.2ml抗原佐劑乳化物,含200μg MBP、BPV 0.1ml;對照組PBS +CFA+BPV抗原佐劑乳化物0.3ml,正常組不作任何處理。觀察和比較各免疫組小鼠的體重變化、發(fā)病臨床表現(xiàn)并進行癥狀分級評分。在二次免疫后取癥狀明顯的模型組、對照組及正常組小鼠的腦組織進行切片和HE染色。觀察比較各免疫組小鼠的組織病理變化,分析不同劑量抗原誘導小鼠發(fā)病情況。無菌分離小鼠脾淋巴細胞,經(jīng)非特異性抗原植物血凝素(PHA)刺激后,ELISA方法檢測脾細胞培養(yǎng)上清中干擾素-γ(IFN-γ)的水平。ELISA方法檢測自身抗體水平。取小鼠脾臟制備單個脾細胞懸液,分別加入10μl單克隆抗體,孵育后用流式細胞儀檢測模型動物脾細胞中CD4+ T細胞和CD4+CD25+ T細胞數(shù)目。無菌取小鼠尾部血清,檢測特異性自身抗體水平。 結果:多數(shù)實驗組小鼠出現(xiàn)EAE的臨床癥狀。實驗組小鼠最早于抗原誘導后第三天開始出現(xiàn)動作遲緩,尾部無力等癥狀。第二次免疫后逐漸出現(xiàn)進食減少,行動緩慢,弓背,后肢或前肢中度無力,跛行甚至后肢完全癱瘓等癥狀,發(fā)病嚴重者死亡。其中高劑量組小鼠有9只出現(xiàn)尾部無力(1級),3只出現(xiàn)后肢或前肢中度無力(2級),1只后肢嚴重無力,跛行(3級),3只死亡(5級),發(fā)病率為89%。低劑量組小鼠8只出現(xiàn)尾部無力(1級),2只出現(xiàn)后肢或前肢中度無力(2級),1只死亡(5級),發(fā)病率為61%。對照組小鼠沒有發(fā)病。光鏡下見實驗組小鼠腦組織血管周圍炎性細胞浸潤,呈“袖套”樣改變,腦組織疏松化,對照組小鼠腦組織未見明顯病理改變。EAE組的IFN-γ的水平明顯高于對照組(P0.05)。CD4+ T細胞數(shù)目明顯上升,CD4+CD25+ T細胞數(shù)目變化不明顯。模型組抗體水平明顯高于對照組(P0.01)。 結論: (1)本研究采用免疫誘導法所建立的BALB/c小鼠EAE動物模型在臨床表現(xiàn)、病理變化等方面均符合EAE改變,模型穩(wěn)定、可靠。(2)實驗動物IFN-γ水平增高,可能是導致自身反應性Th1細胞升高的原因之一。CD4+ T細胞增殖,CD4+CD25+ Treg與CD4+ T細胞比值改變和CD4+CD25+ Treg細胞相對下降可能是EAE的致病機制之一。
【圖文】：

20圖 2 正常組、對照組、模型組小鼠腦組織病理變化（HE×40）A：正常小鼠腦組織；B：對照組小鼠腦組織；C, D, E：模型組小鼠腦組織Fig. 2 The morphological changes of brain tissue in the normal, the control and model.A: the brain tissue of the normal mice; B: the brain tissue of the control mice;C, D, E: the brain tissue of the model mice．

25圖 5 流式分析 CD4+T 細胞和 CD4+CD25+T 細胞數(shù)水平A，B：陰性對照；C：正常組；D：對照組；E：模型組。Fig. 5 FACS analysis of the numbers of CD4+T cell and CD4+CD25+T cell.A, B: negative; C: normal; D: control; E model.
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R-332

【參考文獻】

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1 王康,王國相;多發(fā)性硬化與遺傳研究進展[J];國外醫(yī)學.遺傳學分冊;2003年05期

2 主鴻鵠;CD4~+CD25~+T細胞:一類新被認識的免疫調(diào)節(jié)細胞[J];國外醫(yī)學(免疫學分冊);2004年02期

3 張興梅,黃河清,陳康寧,賀偉峰;基因治療人類多發(fā)性硬化癥的可能性研究:腺病毒轉(zhuǎn)染CTLA-4Ig對動物實驗性自身免疫性腦脊髓炎病理過程的抑制或阻斷作用(英文)[J];中國臨床康復;2004年31期

4 楊妙雄;吳鋼;;Th1/Th2細胞與實驗性自身免疫性腦脊髓炎[J];醫(yī)學綜述;2006年10期

5 張鳳蘊,呂雪瑩,于偉玲,王麗群,王琳,李殿俊;實驗性變態(tài)反應性腦脊髓炎幾種細胞因子的檢測[J];中國神經(jīng)免疫學和神經(jīng)病學雜志;2000年01期

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本文編號：2574131