【摘要】： 研究背景 乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是全世界重要的衛(wèi)生問題，中國是乙肝高發(fā)國家，，攜帶者有一億二千萬。暴露于HBV能引起多種感染結(jié)局，研究表明多種因素在發(fā)病過程中發(fā)揮作用，近年來遺傳流行病學研究提供了充分的證據(jù)說明人群中的遺傳變異是引起乙肝易感性的重要因素。本文應用以人群為基礎的病例對照研究方法，以腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factorα，TNFα)和人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)-DQB1、DRB1為候選基因分析宿主遺傳因素與中國人群HBV感染結(jié)局的相關(guān)性。 研究方法 以196例慢性乙肝患者(chronic hepatitis B patients，CHB)、184例無癥狀慢性HBsAg攜帶者(chronic HBsAg carriers，CC)和143例白限性HBV感染者(spontaneously cleared Subjects，SC)為研究對象，應用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism，PCR-RFLP)和聚合酶鏈反應-序列特異性引物(polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP)檢測方法，分析TNF-α啟動子區(qū)基因多態(tài)性與HBV感染結(jié)局的相關(guān)性。 在389例慢性乙肝患者、246例無癥狀慢性HBsAg攜帶者和198例自限性HBV感染者中采用PCR-SSP方法探討HLA-DQB1、DRB1基因多態(tài)性對感染結(jié)局的影響。 研究結(jié)果 1．TNF-α啟動子區(qū)基因多態(tài)性與HBV感染結(jié)局的相關(guān)性 以自限性感染者為對照進行病例對照研究，經(jīng)logistic回歸分析調(diào)整掉混雜因素的影響后，TNF-α-857TT在CHB組的頻率顯著低于SC組(9.18％vs17.48％；P=0.03，OR=0.48，95％CI=0.24-0.94)。TNF-α-238G／A、-308G／A、-857C／T、-863C／A、-1031T／C組成的單倍型GGCAC在CHB組的頻率顯著低于SC組(8.16％vs13.29％，P=0.03，OR=0.58，95％CI=0.34-0.98)。 以無癥狀慢性HBsAg攜帶者為對照進行病例對照研究，經(jīng)logistic回歸分析調(diào)整掉混雜因素的影響后，TNF-α-863CC基因型在CHB組的頻率顯著高于CC組(62.24％vs 45.11％，P=0.01，OR=0.85，95％CI=1.15-2.98)。TNF-α-238G／A、-308G／A、-857C／T、-863C／A、-1031T／C組成的單倍型GGCCT、GGCCC、GGTCT在CHB組的頻率顯著高于CC組(45.66％vs36.14％，P=0.008，OR=1.48，95％CI=1.10-2.01；13.27％vs7.61％，P=0.01，OR=1.86，95％CI=1.12-3.10；10.71％vs6.25％，P=0.04，OR=1.80，95％CI=1.03-3.16)。 2．HLA-DQB1、DRB1基因多態(tài)性與HBV感染結(jié)局的相關(guān)性 (1)以自限性感染者為對照進行病例對照研究 經(jīng)logistic回歸分析調(diào)整掉混雜因素的影響后，DQB1*0301／4、DQB1*0303、DRB1*11、DRB1*12在CHB組的頻率顯著高于SC組(26.61％vs16.67％，P=0.0002，OR=1.86，95％CI=1.35-2.57；16.58％vs11.36％，P=0.007，OR=1.70，95％CI=1.16-2.49；5.91％vs2.27％，P=0.003，OR=3.09，95％CI=1.47-6.51；16.58％vs8.84％，P=0.0008，OR=2.01，95％CI=1.34-3.03)；DQB1*0602、DQB1*0604、DRB1*01、DRB1*13在CHB組的頻率顯著低于SC組(14.01％vs20.96％，P=0.005，OR=0.72，95％CI=0.48-0.86；1.16％vs3.79％，P=0.01，OR=0.34，95％CI=0.14-0.80；1.67％vs4.29％，P=0.02，OR=0.42，95％CI=0.19-0.89；2.44％vs5.81％，P=0.003，OR=0.38，95％CI=0.20-0.72)。 HLA-DRB1-DQA1-DQB1單倍型*11-*0501-*0301／4在CHB組的頻率顯著高于SC組(3.21％vs0.52％，P=0.004，OR=6.37，95％CI=1.46-39.13)；*09-*0302-*0602在CHB組的頻率顯著低于SC組(1.54％vs4.40％，P=0.003，OR=0.34，95％CI=0.15-0.76)。 (2)以無癥狀慢性HBsAg攜帶者為對照進行病例對照研究 經(jīng)logistic回歸分析調(diào)整掉混雜因素的影響后，DQB1*0301／4、DQB1*0303在CHB組的頻率顯著高于CC組(26.61％vs21.75％，P=0.04，OR=1.35，95％CI=1.02-1.80；16.58％vs9.55％，P=0.001，OR=1.87，95％CI=1.29-2.72)；DQB1*0601、DRB1*04、DRB1*13在CHB組的頻率顯著低于CC組(4.88％vs9.96％，P=0.006，OR=0.52，95％CI=0.33-0.83；10.03％vs14.84％，P=0.002，OR=0.58，95％CI=0.41-0.82；2.44％vs5.28％，P=0.003，OR=0.40，95％CI=0.21-0.73)。 HLA-DRB1-DQA1-DQB1單倍型*03-*0501-*0201、*11-*0501-*0301／4、*12-*0601-*0301／4和*09-*0302-*0303在CHB組的頻率顯著高于CC組(2.31％vs0％，P=0.0007，OR：1.65，95％CI=1.58-1.72；3.21％vs0.41％，P=0.0007，OR=8.13，95％CI=1.86-49.89；3.98％vs0.81％，P=0.0008，OR=5.06，95％CI=1.69-17.00；6.43％vs0.20％，P＜0.0001，OR=33.72，95％CI=5.02-659.55)。*08-*0301-*0601、*09-*0301-*0303在CHB組的頻率顯著低于CC組(2.31％vs4.47％，P=0.03，OR=0.51，95％CI=0.26-0.99；2.44％vs5.08％，P=0.01，OR=0.47，95％CI=0.24-0.89)。 研究結(jié)論 綜合以自限性HBV感染者和無癥狀慢性HBsAZ攜帶者為對照開展的病例對照研究，本研究可得出如下結(jié)論：攜帶TNF-α-863CC、DQB1*03等位基因(DQB1*0301／4、*0303)、單倍型DRB1*11-DQA1*0501-DQB1*0301／4是乙肝慢性化的危險因素：攜帶TNF-α-857TT、DQB1*06等位基因(DQB1*0601、*0602、*0604)、DRB1*13的個體在HBV感染后不易于發(fā)生慢性化。 研究背景 慢性乙型肝炎一直是我們國家的沉重經(jīng)濟、社會和衛(wèi)生負擔，我國每年用于治療乙肝相關(guān)疾病的直接醫(yī)療費用約三百億元人民幣。α干擾素(Interfronα，IFNα)是目前治療乙肝的一線用藥，個體對IFNα的應答差異是影響IFNα臨床用藥的主要問題。本研究采用巢式病例對照研究設計，以人類白細胞抗原(human leukocyte antigen，HLA)Ⅱ類基因和α干擾素抗病毒通路上α干擾素受體2(interferonαreceptor 2，IFNAR2)基因和粘病毒抵抗蛋白A(myxovirus-resistance A，MxA)基因為候選基因開展干擾素治療乙肝的藥物基因組學研究。 研究方法 以252例IFNα治療的慢性乙肝患者為研究對象，應用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態(tài)性(PCR-RFLP)方法，分析IFNAR2 rs2284551 G／A、rs2248202 C／A、rs4986956 T／C和MxA-88 G／T、-123 C／A、20 C／A、rs467558 C／T、rs469390 G／A基因多態(tài)性與干擾素治療乙肝療效的相關(guān)性；采用聚合酶鏈反應-序列特異性引物(PCR-SSP)方法探討HLA-DQB1、DRB1基因多態(tài)性對干擾素治療乙肝療效的影響。 研究結(jié)果 1．經(jīng)過3-6個月的治療后，治療的總應答率為69.1％，其中完全應答率16.3％(41／252)，部分應答率52.8％(133／252)。 2．完全應答組和部分應答組患者基線ALT值顯著高于無應答組(189.0 IU／L156.5IU／Lvs101.0IU／L，P=0.001)。完全應答者、部分應答者和無應答者間在性別、年齡和病毒基因型構(gòu)成方面，均未見統(tǒng)計學差異(P＞0.05)。 3．經(jīng)多因素logistic回歸分析，調(diào)整掉年齡、性別等混雜因素的影響后，DQB1*0501和DQB1*0303等位基因在應答組的頻率顯著低于無應答組(1.50％vs4.73％，P=0.03，OR=0.27，95％CI=0.08-0.86；17.07％vs26.35％，P=0.01，OR=0.55，95％CI=0.34-0.87)；DRB1*14等位基因在應答組的頻率顯著高于無應答組(5.99％vsl.35％，P=0.04，OR=4.65，95％CI=1.07-20.16)。 4．單倍型分析表明DRB1*09-DQA1*0302-DQB1*0303在應答組的頻率顯著低于無應答組(6.89％vs14.86％，P=0.005，OR=0.42，95％CI=0.22-0.82)。 5．經(jīng)logistic回歸調(diào)整掉混雜因素的影響后，應答組MxA20AA的頻率顯著低于無應答組(10.92％vs21.79％，P=0.03．OR=0.45，95％CI=0.22-0.94)。IFNAR2rs2284551、rs2248202、rs4986956的各基因型在應答組和無應答組的頻率沒有顯著差異。 結(jié)論 患者基線ALT高值與對IFNα的應答相關(guān)。攜帶MxA20AA、HLA-DQB1*0501、DQB1*0303和單倍型DRB1*09-DQA1*0302-DQB1*0303的個體對IFNα治療效果可能較差；攜帶DRB1*14等位基因的個體可能對IFNα治療的應答較好。本研究沒有證據(jù)表明IFNAR2基因多態(tài)性與IFNα治療乙肝的近期療效相關(guān)。 研究背景 發(fā)作性運動源性舞蹈徐動癥(PKC)是一種常染色體顯性遺傳疾病，以突然運動誘發(fā)的、反復發(fā)作的不自主運動為特征。目前國內(nèi)外學者還沒有找到其致病基因。本研究在一個中國家系中對PKC的致病基因進行定位并篩查突變。 研究方法 在中國浙江收集了一個PKC家系，共16例受試者(5例患病，11例正常人)。從16號染色體上選擇了9個微衛(wèi)星標記，對每例受試者進行基因分型，采用linkage軟件計算每個遺傳標記與疾病之間的兩點LOD值以對PKC致病基因進行初步定位。從定位的區(qū)域選擇10個候選基因，通過PCR-測序或PCR-變性高效液相色譜(PCR-DHPLC)的方法進行突變篩查。 結(jié)果 兩點LOD值在D16S3081處(57.79CM)最大，為1.21，單倍型分析表明D16S3093／D16S685／D16S690／D16S3081／D16S3080 D16S411／D16S3136／D16S3112／D16S3057這九個遺傳標記高度連鎖，單倍型5-3-8-3-4-2-5-5-6幾乎只出現(xiàn)在患者中。從該區(qū)域附近選擇了10個候選基因進行突變篩查：包括電壓依賴的鈣通道蛋白γ-3亞基(CACNG3)、白介素4受體α基因(IL4R)、腺苷酸環(huán)化酶7基因(ADCY7)、氨基酸磺基轉(zhuǎn)移酶基因(STM)、磷酸酯酶4催化基因(PPP4C)、ATP結(jié)合盒C家族成員基因(ABCC11和ABCC12)、谷氨酸鹽受體離子通道型N-甲基-D-天門冬氨酸鹽亞基2A(GRIN2A)、溶質(zhì)載體家族6成員2(SLC6A2)和溶質(zhì)載體家族5成員2(SLC5A2)，未發(fā)現(xiàn)有意義的突變。 結(jié)論 將PKC的致病基因定位在57.79CM～77.13CM(16p12.1-q13)之間的區(qū)域內(nèi)，排除了CACNG3、IE4R、ADCY7、STM、PPP4C、ABCC11、ABCC12、GRIN2A、SLC6A2和SLC5A2基因作為PKC致病基因的可能。
【圖文】：

TNF一

用Hapmap網(wǎng)站中algorithrn一 Tagger-PairwiseTagging法選擇中國漢族人群的IFNARZ基因標簽SNPs，共找到三個標簽SNPs，分別是 IFNARZrs2284551刀G、 IFNARZrs2248202C/A和 IFNARZrs4986956T/C。參數(shù)設定如圖2一2所示。所選擇的八個SNPS在染色體上的相對位置如圖2一3所示。圖2一 2Algorithm一 Tagger-pairwiseTagging法選擇標簽sNps的參數(shù)設置示例‘遙日困且皿刃月國日目.....PoPulatio一、CHB節(jié) PairwiseMethods:1竺獷r里竺不竺乎”*竺閉Rsqualee一 toffo·8咦「pl MAFcu:off互互三…尸l，.Ic， udesNpol』些=口口l〔xc.udes，psl一絲旦蘭」p-。es.，n。e。，e，l一竺些二川0一rPu，format夕text‘一 SavetoD一sk竺迫!衛(wèi)引竺創(chuàng)注 :Rsquarecut。ff
【學位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R512.62;R373;R742.2

【參考文獻】

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本文編號：2573996