【摘要】： 神經(jīng)干細(xì)胞的定向誘導(dǎo)分化是當(dāng)前神經(jīng)干細(xì)胞研究領(lǐng)域的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。以往的研究已經(jīng)證明激活素可以促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞存活,具有神經(jīng)營養(yǎng)因子的作用。但是激活素對神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用以及其誘導(dǎo)機(jī)制仍不清楚。 在本研究中,我們詳細(xì)探討了激活素A和bFGF對胚胎14天的胎腦紋狀體神經(jīng)干細(xì)胞及傳代培養(yǎng)的HT22細(xì)胞向酪氨酸羥化酶(TH)陽性細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用,結(jié)果表明,激活素A和bFGF可協(xié)同作用使神經(jīng)干細(xì)胞及傳代培養(yǎng)的HT22細(xì)胞中TH蛋白表達(dá)增加,而且同樣使TH mRNA水平和啟動(dòng)子活性增強(qiáng)。 同時(shí)我們還探討了激活素A和bFGF對胚胎14天的胎腦中隔神經(jīng)干細(xì)胞及傳代培養(yǎng)的HT22細(xì)胞向膽堿乙酰轉(zhuǎn)移酶(ChAT)陽性細(xì)胞的分化誘導(dǎo)作用,結(jié)果表明,激活素A和bFGF可協(xié)同作用使神經(jīng)干細(xì)胞及傳代培養(yǎng)的HT22細(xì)胞中ChAT mRNA表達(dá)增加,并可增強(qiáng)ChAT啟動(dòng)子活性。 我們進(jìn)一步利用免疫印跡法檢測了此協(xié)同作用的機(jī)制,結(jié)果顯示,激活素A和bFGF處理后細(xì)胞外信號調(diào)節(jié)蛋白激酶1和2(ERK1/ERK2)MAPK以及Smad均被明顯激活。而且我們還發(fā)現(xiàn)U0126(一個(gè)特異的ERK-激活激酶MEK-1/2的抑制物)能夠阻斷激活素A和bFGF誘導(dǎo)的ERK1/2磷酸化、向核內(nèi)移行以及TH啟動(dòng)子的活性,而SB203508(P38激酶抑制物)則無此效果。綜上所述,這些結(jié)果提示激活素A介導(dǎo)的信號可以和bFGF信號共同作用,通過選擇性激活ERK型MAPK和Smad3信號來誘導(dǎo)小鼠紋狀體和HT-22細(xì)胞中TH的表達(dá),提示激活素A和bFGF可在神經(jīng)系統(tǒng)共同作用調(diào)節(jié)特異性神經(jīng)細(xì)胞的分化。
【圖文】：

33圖 1.激活素 A 和 bFGF 誘導(dǎo) E14 紋狀體細(xì)胞中 TH 的表達(dá)A、D、G、J 是用 TH 抗體染色的結(jié)果B、E、H、K 是用 TuJ1 抗體染色的結(jié)果C、F、I、L 是 TH 抗體及 TuJ1 抗體染色的重疊結(jié)果ig. 1. Activin A and bFGF induce TH-immunoreactivity in the E14 striatal cells.

二、激活素 A 和 bFGF 對 HT22 細(xì)胞的中 TH 的影響為了驗(yàn)證激活素 A 和 bFGF 對神經(jīng)細(xì)胞中 TH 表達(dá)的協(xié)同作否在神經(jīng)細(xì)胞系中同樣存在，，我們進(jìn)一步檢測了激活素 A 和 bF小鼠海馬神經(jīng)細(xì)胞系 HT22 細(xì)胞中 TH 表達(dá)的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，活素 A 和 bFGF 處理 36 小時(shí)后，大多數(shù)的多角形細(xì)胞變成了高熟的神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)，包括突觸變長、細(xì)胞體變小、細(xì)胞與細(xì)胞之過突觸形成網(wǎng)絡(luò)。提取胞漿蛋白，進(jìn)行免疫印跡分析，結(jié)果如圖所示，激活素 A 和 bFGF 協(xié)同誘導(dǎo) TH 表達(dá),與未經(jīng)刺激的對照組TH 的表達(dá)量增加了 9 倍（見圖 2B）。A
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R329

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本文編號：2573695