【摘要】：目的 PAK1(P21-activated kinase1)是一保守的絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶,為Rho家族小鳥苷三磷酸酶(Rho-GTPase)Cdc42和Rac下游重要的靶蛋白,參與許多重要的細(xì)胞活動(dòng)。PAK1主要分布在腦、肌肉、脾中。PAK1包含N-端調(diào)節(jié)區(qū)和C-末端激酶區(qū),它的N-末端調(diào)節(jié)區(qū)含GTP酶結(jié)合域(GTPase binding domain,GBD),它可介導(dǎo)PAK1與Rac和Cdc42的結(jié)合。研究表明,PAK1具有廣泛的生物學(xué)功能,包括細(xì)胞骨架的動(dòng)力學(xué)調(diào)節(jié),細(xì)胞移動(dòng),生存和凋亡,細(xì)胞周期,基因轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié),細(xì)胞生長信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)化等,而這些功能的完成是由于PAK1磷酸化其下游靶蛋白引起的。到目前為止,已經(jīng)發(fā)現(xiàn)了多種PAK1的底物及其相互作用蛋白。并且許多證據(jù)足以表明在腫瘤發(fā)生發(fā)展過程中存在PAK1信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑。本研究通過觀察PAK1重組蛋白在原核細(xì)胞中的表達(dá)情況及PAK1在真核細(xì)胞中的定位,為進(jìn)一步研究PAK1的生物學(xué)性能提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 方法 1.總RNA提取及cDNA合成: 總RNA提取按照RNA提取protocol操作完成;在M-MuLV Reverse Transcriptase作用下逆轉(zhuǎn)錄為cDNA。 2.以cDNA為模板擴(kuò)增PAK1 依據(jù)PAK1序列,設(shè)計(jì)2對引物,建立PCR反應(yīng)體系,進(jìn)行PCR循環(huán)設(shè)計(jì),擴(kuò)增PAK1。 3.重組質(zhì)粒的構(gòu)建 將PAK1基因克隆到GST融合蛋白原核表達(dá)載體pGEX-5X-1中,構(gòu)建重組質(zhì)粒pGEX-5X-1/PAK1;同時(shí),利用基因重組技術(shù)將PAK1基因
【圖文】：

fi鄉(xiāng).PGEx一sx一1一APKI質(zhì)粒測序
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：Q55

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前6條

1 王娟霞;周永寧;鄒紹靜;;胃癌組織PAKl表達(dá)及其與臨床病理特征和生存的關(guān)系(英文)[J];癌癥;2010年07期

2 陳學(xué)清;武金寶;楊曉強(qiáng);宋于剛;李明松;;表沒食子兒茶素沒食子酸酯對人大腸癌株SW620增殖的抑制及與PAK1基因表達(dá)的相關(guān)性研究[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2009年08期

3 何國慶;徐晉;裴榮;張杰武;;p21活性蛋白激酶在喉癌和喉咽癌中的表達(dá)及臨床意義[J];中國耳鼻咽喉頭頸外科;2006年08期

4 趙和平;解燕茹;;PAK1在康萊特聯(lián)合5-氟脲嘧啶對Hepal-6肝癌細(xì)胞化療增效中的作用[J];腫瘤基礎(chǔ)與臨床;2010年04期

5 武金寶;南清振;張紹榮;張弟;張振書;宋于剛;;p21活化激酶1基因在大腸癌細(xì)胞中的表達(dá)及意義[J];山東醫(yī)藥;2007年29期

6 張革紅;解燕茹;梁利群;;消癌平聯(lián)合5-氟尿嘧啶對Hepa1-6肝癌細(xì)胞化療增效中的作用[J];山西醫(yī)藥雜志;2011年04期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前3條

1 王桂玲;PAK1互作蛋白ZCW生物學(xué)特性的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2007年

2 陸成偉;姜黃素通過線粒體途徑誘導(dǎo)人脈絡(luò)膜黑色素瘤細(xì)胞死亡[D];吉林大學(xué);2010年

3 楊金星;PAK4在乳腺癌發(fā)病機(jī)制和診斷中的作用研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2010年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前3條

1 楊郁;PI3K/Akt-PAK1信號通路在表皮生長因子誘導(dǎo)乳腺癌細(xì)胞遷移中作用機(jī)制的研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2010年

2 李云慧;P21活化蛋白激酶1互作蛋白ZCW在人結(jié)腸癌中表達(dá)的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

3 李偉杰;PAK1在大腸癌發(fā)生發(fā)展中的作用及機(jī)制的研究[D];山西醫(yī)科大學(xué);2010年

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本文編號：2572086