【摘要】：口蹄疫和豬瘟都是當(dāng)今世界上嚴(yán)重危害家畜的烈性傳染病,發(fā)病率高,流行 快,危害嚴(yán)重。目前,疫苗接種是預(yù)防口蹄疫和豬瘟病毒發(fā)病的主要手段。傳統(tǒng) 的滅活疫苗和弱毒疫苗在防治和消除這兩種疾病的大規(guī)模流行中發(fā)揮了重大作 用。但隨著傳代次數(shù)的增加和對不同細胞的適應(yīng)性增殖,疫苗毒株可能發(fā)生抗原 漂移,加之?dāng)?shù)十年來病毒在大規(guī)模免疫接種壓力下出現(xiàn)抗原變異,現(xiàn)有的傳統(tǒng) 疫苗已不能適應(yīng)新形勢的需要。而且由于其潛在的危險性,使其應(yīng)用受到很大限 制。隨著分子生物學(xué)和分子免疫學(xué)的深入發(fā)展,迫切需要研制新型的基因工程疫 苗。 轉(zhuǎn)基因植物作為生產(chǎn)疫苗的生物反應(yīng)器,具有表達量高,成本低,容易生產(chǎn) 等優(yōu)點。另外,植物表達的抗原蛋白不需要純化,可以作為口服疫苗直接食用。 如:番茄,大豆,牧草,煙草等。VPl和E2分別是口蹄疫病毒和豬瘟病毒的核心 抗原決定簇,能夠誘導(dǎo)機體產(chǎn)生保護性抗體反應(yīng)。研究表明,VPl和E2已經(jīng)在多 種表達系統(tǒng)內(nèi)得到了表達。如:煙草和苜蓿表達的VPl抗原蛋白喂飼小鼠后,能 夠誘導(dǎo)特異性抗體免疫反應(yīng)。為此,本文中將口蹄疫病毒抗原基因VPl和黏膜免 疫佐劑霍亂毒素B亞基(CTB)融合基因在馬鈴薯內(nèi)重組和表達;同時,利用植物 葉綠體基因組高效表達的特點,把豬瘟病毒抗原基因E2重組并轉(zhuǎn)化進煙草和衣藻 葉綠體基因組中,使其高效表達。為利用植物生物反應(yīng)器研制口蹄疫和豬瘟基因 工程疫苗提供理論和實踐依據(jù)。 論文的第二部分研究了將口蹄疫病毒抗原基因VPl和霍亂毒素B亞基融合基因 通過農(nóng)桿菌轉(zhuǎn)染的方法轉(zhuǎn)化到馬鈴薯基因組中,進行重組和表達。通過抗性篩選, 得到了具有卡那霉素抗性的轉(zhuǎn)化植株。對馬鈴薯基因組DNA的PCR擴增、SotJthern blot、Western blot和ELISA分析表明,外源基因已經(jīng)整合進馬鈴薯基因組,并 得到了表達。 論文的第三部分主要研究了煙草葉綠體表達載體PTRE2的構(gòu)建,并通過基因槍 法轉(zhuǎn)化煙草葉綠體基因組,通過壯觀霉素抗性篩選,獲得了一株轉(zhuǎn)化植株苗。經(jīng) 過兩輪抗生素篩選后,分別用CSFV的E2基因及煙草葉綠體同源片段的引物對抗性 植株的葉綠體DNA進行PCR擴增和酶切Southern blot分析,結(jié)果表明目的基因已
【圖文】：

回收并純化目的片段CTB一vPI，與用相同的酶處理的中間載體BP工121一Patatin連接，獲得重組植物表達載體pB工121CTBvPI。其載體的構(gòu)建和酶切鑒定結(jié)果如圖1.1和1.2所示。

馬鈴薯遺傳轉(zhuǎn)化載體PBll21CTBVPI的ysisofexPressionvaetorPBllZICTBVPI.I;lineZ:PBll21CTBVPINeollBamHI1CTBVPIHindllllBamHI.核轉(zhuǎn)化表達載體的農(nóng)桿菌介導(dǎo)的鈴薯轉(zhuǎn)化端完全伸展的2一3片葉從距離基部d后，浸入預(yù)備好的農(nóng)桿菌液中浸泡，干多余菌液，置于MOS固體培養(yǎng)基篩選。選鑒定體在MS。培養(yǎng)基中繼代2一3次后，MS培養(yǎng)基中培養(yǎng)。3一4周后，抗性
【學(xué)位授予單位】：浙江大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：S852.5;Q789

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本文編號：2570754