【摘要】： 目的:觀察人堿性成纖維細胞生長因子(Basic fibroblast growth factor,bFGF)在人間充質(zhì)干細胞(Human mesenchymal stem cells,hMSCs)向脂肪細胞方向分化過程中,對人過氧化物酶體增殖物激活受體-γ2(Peroxisome proliferator-activated receptor-γ2,PPAR-γ2)表達的影響。 方法:全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)人骨髓hMSCs,培養(yǎng)至第四代,按增殖期及分化期是否加入了bFGF 4ng/mL和脂肪誘導劑(羅格列酮5μmol/L+胰島素10μg/mL),將細胞分為6組,并在誘導分化前1d、分化第3d以RT-PCR檢測PPAR-γ2和葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4(Glucose transporter 4,GLUT4)mRNA的表達情況,誘導分化第28d時通過油紅O染色及透射電鏡觀察細胞分化程度,并進行統(tǒng)計學分析。 結(jié)果:hMSCs在未誘導情況下不表達PPAR-γ2,在脂肪誘導劑的作用下表達PPAR-γ2,在bFGF作用下在誘導前就已表達PPAR-γ2;通過油紅O染色和透射電鏡觀察hMSCs經(jīng)脂肪誘導劑誘導分化后胞漿內(nèi)形成大量脂滴。 結(jié)論:bFGF能促進人骨髓hMSCs向脂肪分化過程中PPAR-γ2的表達,能促進人骨髓hMSCs向脂肪細胞方向的分化。
【圖文】：

s 形態(tài)學觀察髓培養(yǎng)法獲取的骨髓細胞體外培養(yǎng) 24h 后倒置顯微鏡下可見態(tài)不規(guī)則；2～3d 倒置顯微鏡下可見部分細胞貼壁，貼壁的呈圓形、橢圓形、多角形、梭形；5～7d 左右呈“集落”樣生迅速，低倍視野下見細胞呈放射狀、旋渦狀向外擴展；14d 左右培養(yǎng)液清亮，懸浮細胞已全部清除；傳代 24 小時后細胞完全，3～5d 天即可達 80～90%融合，貼壁細胞表現(xiàn)為均一、略成形細胞，折光性好，增殖旺盛，保持旋渦狀生長方式，見圖 1至第三代，流式細胞學檢測結(jié)果：CD34、CD45 均為陰性，表現(xiàn)見圖 2。證明所培養(yǎng)的骨髓細胞已經(jīng)純化為比較單一的 hMSC

圖 2 hMSCs 經(jīng) CD45、CD34 抗體標記后流式細胞圖Fig 2 hMSCs with CD45、CD34 antibody in flow cytometry圖注：流式細胞圖橫坐標 SS 為側(cè)向角散射光強度，縱坐標 FS 為前向角散射光強度，PE-CD45為藻紅蛋白熒光素標記抗體，，F(xiàn)ITC-CD34 為異硫氰酸熒光素標記抗體。3.2 RT-PCRPPAR-γ2mRNA 表達情況：3 組分化前無 PPAR-γ2 表達，4 組在分化前已經(jīng)有 PPAR-γ2 的表達；分化第 3d，3 組和 4 組均有 PPAR-γ2mRNA 的表達，且二者的表達差異有統(tǒng)計學意義，p<0.05，4 組較 3 組的表達明顯增強。GLUT4mRNA 表達情況：分化第 3d，3 組和 4 組細胞均有 GLUT4 表達，且二者的表達差異有統(tǒng)計學意義，4 組較 3 組表達明顯增強。具體見表 2 和圖 3。表 2 PPAR-γ2 和 GLUT4 與 18smRNA 的 OD 值之比（n=6， x±S）
【學位授予單位】：安徽醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2007
【分類號】：R329.2

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 張翼澾,達萬明;骨髓增生異常綜合征患者間充質(zhì)干細胞的生物學特性及其支持造血的體外研究[J];中國實驗血液學雜志;2005年05期

本文編號：2566787