【摘要】： 研究目的:為了建立血管平滑肌增殖模型,通過體外培養(yǎng)大鼠主動(dòng)脈和用體外培養(yǎng)血管再傳代培養(yǎng)血管平滑肌細(xì)胞(Vascular Smooth Muscle Cell,VSMC)方法,采用5-溴脫氧尿嘧啶核苷(Bromodeoxyuridine, 5-BrdU)標(biāo)記增殖細(xì)胞并檢測與血管平滑肌細(xì)胞增殖和表型轉(zhuǎn)化相關(guān)的基因高血壓相關(guān)基因-1(Hypertension-Related Gene-1,HRG-1)和平滑肌22α(Smooth Muscle 22 alpha ,SM22α),探討一種較為理想的血管平滑肌增殖的器官和細(xì)胞模型,為血管平滑肌增殖性疾病的研究提供一個(gè)實(shí)驗(yàn)平臺(tái)。 實(shí)驗(yàn)方法:器官模型用成年雄性SD大鼠19只,體重150-200g,用水合氯醛麻醉動(dòng)物,取主動(dòng)脈放入Hanks液中去除周圍多余的脂肪組織和外周組織,剪成1.5cm左右小段,用竹簽損傷內(nèi)皮,分成培養(yǎng)5天、8天和13天3個(gè)實(shí)驗(yàn)組,在含20%胎牛血清DMEM培養(yǎng)基中培養(yǎng),2-3天半量換液一次。正常對照組用未培養(yǎng)的血管,收集血管前24小時(shí)用BrdU標(biāo)記。細(xì)胞模型用體外培養(yǎng)8天的血管和正常未培養(yǎng)的血管,用貼塊法分別培養(yǎng)平滑肌細(xì)胞。用第3-4代細(xì)胞做實(shí)驗(yàn),在收集細(xì)胞前24小時(shí)用BrdU標(biāo)記。以上實(shí)驗(yàn)用HE染色和抗5-BrdU免疫細(xì)胞化學(xué)染色觀察細(xì)胞增殖,用透射電鏡觀察血管平滑肌細(xì)胞的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)變化;RT-PCR檢測與血管平滑肌增殖相關(guān)基因HRG-1和表型標(biāo)志基因SM22α的表達(dá)。 結(jié)果:器官模型:體外培養(yǎng)5天、8天、13天的大鼠主動(dòng)脈用HE染色可見到不同程度的平滑肌細(xì)胞增生,第13天組的血管有明顯斑塊形成,突向管腔。BrdU標(biāo)記的免疫細(xì)胞化學(xué)結(jié)果進(jìn)一步表明:體外培養(yǎng)的主動(dòng)脈血管可見標(biāo)記的增殖平滑肌細(xì)胞,且隨著培養(yǎng)天數(shù)增多標(biāo)記細(xì)胞也增多,透射電鏡觀察到體外培養(yǎng)8天的血管平滑肌細(xì)胞與對照組相比,胞漿中肌絲減少,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)明顯增多,并可見大量的分泌小泡。RT-PCR結(jié)果表明正常血管平滑肌都表達(dá)HRG-1和SM22αmRNA,隨體外培養(yǎng)時(shí)間延長表達(dá)逐漸減少,至培養(yǎng)第13天基本完全消失。提示:體外培養(yǎng)血管可使平滑肌表型從收縮型向分泌型轉(zhuǎn)化,并有平滑肌增殖。細(xì)胞模型:用體外先培養(yǎng)8天的血管傳代培養(yǎng)的平滑肌與正常血管(未培養(yǎng))傳代培養(yǎng)的平滑肌細(xì)胞相比,BrdU標(biāo)記增生細(xì)胞明顯增多,RT-PCR結(jié)果顯示:正常血管傳代培養(yǎng)的平滑肌HRG-1和SM22αmRNA均有表達(dá),而體外先培養(yǎng)8天后血管再傳代
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R-332

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本文編號(hào)：2566658