【摘要】： HSP70是一類(lèi)ATP依賴的分子伴侶，分子量約為70kDa。用腫瘤組織中提取的HSP70對(duì)小鼠進(jìn)行免疫，可以預(yù)防相應(yīng)腫瘤的發(fā)生和生長(zhǎng)。最近的研究表明HSP70攜帶的小肽及其ATPase結(jié)構(gòu)域是HSP70抽提物激活腫瘤特異性免疫反應(yīng)的關(guān)鍵。根據(jù)這些發(fā)現(xiàn)，我們推測(cè)腫瘤相關(guān)性抗原蛋白和HSP70的融合蛋白能用于免疫治療，激活機(jī)體抗原特異性免疫反應(yīng)，抑制腫瘤生長(zhǎng)。本論文的工作針對(duì)以HSP70為基礎(chǔ)的融合蛋白進(jìn)行了一系列的抗腫瘤研究。 在第一章中，我們構(gòu)建了包含HSP70家族中組成型表達(dá)的Hsc70蛋白N端ATPase結(jié)構(gòu)域(Hsc70NTD)和B16腫瘤相關(guān)性抗原TRP2的融合蛋白，并利用分子篩層析的方法解決了包涵體的復(fù)性問(wèn)題。融合蛋白的復(fù)性情況可以通過(guò)其ATPase活性得以測(cè)定。用融合蛋白免疫小鼠后，在其體內(nèi)檢測(cè)到了TRP2特異性淋巴細(xì)胞免疫反應(yīng)，而且對(duì)免疫后的小鼠進(jìn)行B16腫瘤接種實(shí)驗(yàn)，腫瘤的生長(zhǎng)明顯受到抑制。 在第二章中，我們將腫瘤相關(guān)性抗原TRP2與全長(zhǎng)HSP70融合，發(fā)現(xiàn)融合蛋白Hsp70-TRP2的免疫效果優(yōu)于只含有HSP70的N端ATPase結(jié)構(gòu)域的融合蛋白HspTONTD-TRP2。我們認(rèn)為Hsp70融合腫瘤相關(guān)性抗原的抗腫瘤的過(guò)程，包含抗原依賴性的CTL誘導(dǎo)和非抗原依賴性的免疫反應(yīng)的活化兩種不同的機(jī)制。 在第三章中，我們構(gòu)建了四種融合B16相關(guān)性抗原的HSP70融合蛋白對(duì)小鼠進(jìn)行聯(lián)合免疫，發(fā)現(xiàn)相比于單一種類(lèi)的HSP70融合蛋白，多種HSP70融合蛋白聯(lián)合免疫可以避免腫瘤細(xì)胞因丟失腫瘤相關(guān)性抗原引起的免疫逃避，具有更好的抗腫瘤效果。同時(shí)對(duì)非B16腫瘤細(xì)胞，聯(lián)合免疫也有一定的預(yù)防作用。
【圖文】：

圖2.重組蛋白的表達(dá)與純化70NTD一TRPZ，Hse70NTD和TRPZ。相應(yīng)的轉(zhuǎn)化子在IPTG的誘導(dǎo)下均表達(dá)出了目白，占總蛋白的50%以上，，見(jiàn)圖2。其中除了Hsc70NTD同時(shí)以可溶蛋白和包兩種形式存在與發(fā)酵產(chǎn)物中，Hs。70NTD一TRPZ和TRPZ均為包涵體。我們嘗試改變表達(dá)條件如降低表達(dá)溫度，降低IPTG濃度等，期待獲得可溶性Hsc70NTD一TRPZ和TRPZ，但均沒(méi)有成功。我們也嘗試更換表達(dá)載體，融合GST目的蛋白上使表達(dá)產(chǎn)物可溶化，這種嘗試也沒(méi)有成功。目的蛋白包涵體經(jīng)反復(fù)的洗滌后，純度大于95%，見(jiàn)圖2。雖然我們獲得了可溶性Hsc70NTD，為實(shí)驗(yàn)有可比性，我們從包涵體中純化Hsc7ONTD。目的蛋白經(jīng)SDS一PAGE電考馬斯亮蘭染色確定其濃度和純度。.重組蛋白的復(fù)性和ATpase酶活檢測(cè)包涵體用含SM尿素的變性緩沖液溶解，過(guò)SephadexG一25柱使其復(fù)性。復(fù)性，上樣lml，樣品中蛋白質(zhì)濃度用變性緩沖液調(diào)整為0.5mg/m1。用紫

Seohedex8-25柱誣性蛋白質(zhì)
【學(xué)位授予單位】：復(fù)旦大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R392

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 高海霞;松江鱸（Trachidermus fasciatus）熱應(yīng)激蛋白及相關(guān)蛋白的cDNA克隆與原核表達(dá)[D];山東大學(xué);2011年

本文編號(hào)：2566208