發(fā)布時(shí)間：2019-11-23 13:45

【摘要】：神經(jīng)干細(xì)胞(neural stem cell，NSC)是具有高度自我更新能力和多項(xiàng)分化潛能的神經(jīng)前體細(xì)胞。它能最終分化形成神經(jīng)元、星形膠質(zhì)細(xì)胞和少突膠質(zhì)細(xì)胞，因此對(duì)治療神經(jīng)退行性疾病和損傷有著廣闊的應(yīng)用前景，目前已成為神經(jīng)系統(tǒng)領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)。而氧是生命存在的必要條件，也是細(xì)胞生理功能的一種重要調(diào)節(jié)因子，氧濃度的變化可影響細(xì)胞的功能狀態(tài)。目前關(guān)于低氧作用的研究多集中在低氧對(duì)細(xì)胞的損傷和有關(guān)的適應(yīng)機(jī)制方面，而關(guān)于低氧在細(xì)胞增殖和分化中的作用研究較少，特別是關(guān)于低氧對(duì)NSCs增殖和分化的影響目前還不太清楚。低氧誘導(dǎo)因子-1(hypoxia inducible factor 1，HIF-1)是細(xì)胞低氧反應(yīng)的核心調(diào)控因子，諸多研究表明它在腫瘤細(xì)胞增殖中起著重要的調(diào)控作用，但關(guān)于它是否參與低氧對(duì)NSCs增殖和分化的影響國(guó)內(nèi)外未見報(bào)道。因此本研究利用各種細(xì)胞分子生物學(xué)手段，比較了不同氧濃度對(duì)NSCs增殖和分化的影響，觀察了低氧后NSCs內(nèi)HIF-1α的表達(dá)變化，并探討HIF-1α在低氧引起的NSCs增殖和分化中的作用。 一、神經(jīng)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)和鑒定以及低氧濃度測(cè)定 Wistar孕大鼠(E13.5d)戊巴比妥鈉麻醉后，，無菌條件下取出胎鼠，分離胎鼠中腦NSCs。傳3代后，制成單細(xì)胞懸液，在涂有多聚賴氨酸(0.1mg／mL)的confocal皿中貼壁半小時(shí)，4％多聚甲醛固定后，用免疫組化進(jìn)行Nestin鑒定，鑒定結(jié)果表明幾乎所有細(xì)胞均為Nestin染色陽性，說明我們培養(yǎng)的NSCs較純，可用于下面的實(shí)驗(yàn)。 我們把通過以上方法得到的NSCs分別置于不同環(huán)境氧濃度中(20％ O_2，10％ O_2，3％ O_2，0％ O_2)，培養(yǎng)3d后，分別用血?dú)夥治鰞x和自動(dòng)生化分析儀測(cè)定細(xì)胞培養(yǎng)上清中的氧分壓和乳酸濃度。氧分壓依次為153±7、105±5、80±10和65±15mmHg；乳酸濃度依次為0.875±0.251、1.425±0.112、1.825±0.220和2.096±0.233mmol／L。由以上結(jié)果可以看出，隨著環(huán)境氧濃度的下降，細(xì)胞培養(yǎng)上清中的氧分壓隨之下降，而乳酸濃度隨之增高，在環(huán)境氧濃度為0％ O_2時(shí)，細(xì)胞培養(yǎng)上清的乳酸濃度達(dá)2.096mmol／L。乳酸濃度過高不利于細(xì)胞生長(zhǎng)，因此在以下的實(shí)驗(yàn)中，我們采用10％和3％氧濃度來觀察低氧對(duì)NSCs增殖和分化的影響。
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 李海生,陳金武,朱玲玲,趙彤,趙惠卿,吳麗穎,丁愛石,范明;持續(xù)低氧增強(qiáng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外增殖[J];基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床;2005年03期

2 婁向新,袁崇剛;神經(jīng)干細(xì)胞的研究現(xiàn)狀及運(yùn)用前景[J];生命科學(xué)研究;2004年S1期

3 趙惠卿,朱玲玲,趙彤,吳麗穎,李海生,丁愛石,范明;低氧對(duì)胚胎干細(xì)胞增殖的影響[J];中國(guó)應(yīng)用生理學(xué)雜志;2004年03期

本文編號(hào)：2564984